猪传染性胸膜肺炎(Porcine Contagious Pleuropneumonia, PCP)是由猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae, APP)引起的并导致猪出现以胸膜炎及肺炎为特征的一种急性或慢性传染病。近年来,本病在世界各工业化养猪国家中广泛流行,给各国养猪业带来极大的损失,现被列为全球公认的危害养猪业的五大传染病之一。对于本病的预防多采用菌体灭活苗来进行,但由于APP血清型众多,且各血清型间的交叉保护力有限,加之灭活苗缺少APP在生长过程中分泌的毒素,而这些毒素已经被证明了APP重要的保护性抗原及灭活过程中抗原成分存在或多或少破坏及丢失的情况,灭活苗在预防本病的效果上并不十分突出。所以,对于本病新型疫苗的研究已经成包括国外在内的很多研究人员的关注,已经成为猪传染病领域的一个热点。本研究分成两个部分,具体如下：第一部分,为克服现有检测APP技术中所存在的操作复杂、设备昂贵、耗时长等问题,本研究通过DNAstar等软件对血清1-12型的APP的dsbe-like基因进行序列比对,找出其中同源性较高的序列,利用在线引物设计软件设计了4条LAMP引物,并对LAMP方法的各种反应条件进行优化,确定了25μ1的反应体系。在特异性检验中,利用LAMP方法对猪身上常见的几种病进行检测,结果表明,只有用APP核酸作为模板时才可出现阳性反应,说明本LAMP方法具有较好的特异性；在灵敏性检验中,通过对APP核酸进行梯度稀释,发现本LAMP方法的最低检测极限为5个拷贝／反应,是已报道的PCR方法的20倍。最后,分别利用细菌分离、PCR及本LAMP方法对外表健康猪肺脏与疑似感染APP猪肺脏进行检测以探索本LAMP方法在检测临床样品中的表现,结果显示,在外表健康猪组中细菌分离、PCR方法、LAMP方法的检出率分别为0%、2%、4%,而疑似感染组中三种方法的阳性率分别为6.98%、58.14%、69.77%,且LAMP与细菌分离、PCR方法的阳性符合率为100%,说明本LAMP方法更加适合于APP的临床检测。综上,加之,本LAMP反应反拥有的成本低廉、不需要专业的操作技能等诸多优点,能较好地满足目前对猪传染性胸膜放线杆菌现场检测的迫切需要,对防止我国猪接触传染性胸膜肺炎病的发生和控制该病的流行应该有重要意义。第二部分,通过分析比对APP 5型的Apx IV基因序列,利用DNAstar等软件分析Apx Ⅳ基因中的可能存在抗体表位区并设计一对引物扩增出Apx Ⅳ基因序列中463-1261这一片段,并将其连接至pMD18-T质粒成功构建克隆载体,再通过酶切将目的片段连接至pET21a(+)成功构建表达载体并转化表达菌BL 21,通过各位表达条件的优化,成功表达了目的蛋白,经过经过破碎菌体及SDS-PAGE检测,蛋白以包涵体的形式表达。将重组表达的蛋白进行纯化、复性步骤后,经Western-blot抗原性分析表明所得到的重组蛋白纯度较高且具有良好的反应原性。再通过盐析的方法提取了APP5型的Apx Ⅰ、Apx Ⅱ两种溶血外毒素。最后,将灭活的含有不同剂量的重组表达Apx Ⅳ与灭活的Apx Ⅰ、Apx Ⅱ灭活菌使用白油为佐剂分别制备疫苗,采取背部多点注射的方式免疫小鼠,再以我国常见的血清5型的强毒株以10倍于LD50的剂量进行攻毒,结果显示,各组疫苗中随着重组Apx Ⅳ含量的增加,其免疫保护率也随之升高,表明本研究所重组的Apx Ⅳ能提供给免疫小鼠对相同血清型细菌攻毒一定的免疫保护作用。综上所述,重组的Apx Ⅳ作为额外成分添加后可增强亚单位疫苗的免疫保护力,但是,至于是如何提高灭活苗免疫保护效果的,其机理还有待进一步研究。