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目的:本实验通过等温组装法构建重组溶瘤腺病毒 RCAdC68.pIX-EGFP，并通过比较RCAdC68.pIX-EGFP与复制缺陷型重组腺病毒AdC68-ΔE1-EGFP对结肠癌细胞的杀伤作用，初步观察RCAdC68.pIX-EGFP对结肠癌细胞增殖的影响。 方法:以黑猩猩型腺病毒AdC68为模板，利用等温组装法构建腺病毒衣壳蛋白pIX展示EGFP的重组溶瘤腺病毒质粒，HEK293细胞中包装成完整病毒并扩增、纯化，获得具有溶瘤效应可表达 EGFP的重组溶瘤腺病毒载体，命名为RCAdC68.pIX-EGFP。以不同的病毒剂量（100、500、2500、12500vp/cell）感染结肠癌细胞HCT116、NCI-H508、HT-29及人胚肾细胞HEK-293，分别于感染后第3、5、7天用MTT法检测RCAdC68.pIX-EGFP对不同细胞的抑制率，结晶紫染色实验检测RCAdC68.pIX-EGFP对不同细胞的杀伤作用，荧光显微镜与相差显微镜观察细胞形态学变化和病变情况。 结果:重组溶瘤腺病毒载体 RCAdC68.pIX-EGFP构建成功。RCAdC68.pIX-EGFP对结肠癌细胞HCT116、NCI-H508、HT-29的增殖抑制作用与病毒感染剂量及感染时间成正比，以500vp/cell病毒感染剂量感染细胞7天后，RCAdC68.pIX-EGFP对 HCT116、NCI-H508、HT-29、HEK293细胞的抑制率分别为86.70％、96.85%、99.70%、99.99%，AdC68-ΔE1-EGFP的细胞抑制率分别为6.57%、11.46%、9.11%、99.99%，RCAdC68.pIX-EGFP与AdC68-ΔE1-EGFP对结肠细胞增殖抑制作用的差异有统计学意义（P＜0.05），而对HEK-293细胞增殖抑制作用的差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论:本研究成功构建重组溶瘤腺病毒载体 RCAdC68.pIX-EGFP，RCAdC68.pIX-EGFP能显著抑制结肠癌细胞HCT116、NCI-H508、HT-29的增殖，初步显示出RCAdC68.pIX-EGFP作为溶瘤病毒载体治疗肿瘤的潜能。