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前言mGluR1是代谢型谷氨酸受体中的一员,属于G蛋白偶联受体,具有七个跨膜基序,受体的细胞外区（N端）、跨膜区及其细胞内和细胞外的肽链环具有高度保守性。目前认为,mGluR1主要与磷脂酶C（PLC）和细胞内钙信号偶联,通过调节多种跨膜离子通道和细胞内第二信使系统的活性进而调节神经元的兴奋性及突触传递。自发性癫痫大鼠（spontaneously epileptic rats,SERs）是我校2000年从日本京都大学引进的遗传性癫痫动物模型,它是一种纯合型的双基因突变大鼠,其突变基因tm来自于东京Wistar大鼠突变系tremor,突变基因zi来自于德国斯普拉格-道利鼠突变系zitter,两种突变基因均为常染色体隐性遗传。出生后8周,SERs就会自发性的出现癫痫大发作和失神样小发作,以及低电压快波和5～7Hz棘波与慢波混合的脑电图。SERs对抗癫痫药的反应同癫痫患者相似:小发作可以被三甲双酮和乙琥胺阻滞,癫痫持续状态可被苯妥英阻滞,而它们又都可以为苯巴比妥、丙戊酸钠阻滞。因此,SERs是学习人类遗传性癫痫、评价抗癫痫药的极好动物模型。癫痫病因复杂,目前认为兴奋性和抑制性氨基酸失衡,在癫痫发病中起十分重要的作用。本文欲通过几种实验方法检测在SERs海马中mGluR1表达的情况,寻找兴奋性和抑制性氨基酸失衡在癫痫发病中的作用,进一步揭示癫痫可能的发病机制。材料与方法1、RT-PCR技术检测mGluR1 mRNA表达实验动物:Wistar大鼠和SERs 2～3个月龄,在标准条件下饲养（12h交替照明,湿度为50%～70%,24℃）,动物自由进食饮水,每组8只。标本制备:大鼠在麻醉状态下断头,迅速取出脑,剥离海马置-80℃冻存备用。Trizol法提取总RNA,测量总纯度,若OD260/OD280在1.8～2.0之间,表示样品RNA较纯,符合实验要求。RT-PCR反应:mGluR1引物,452bp（上游:5’-CATGCCCATTTTGTCCTACC-3’,下游:5’-CTTCTTTCTCCGGAAAATGTTG-3’）;mGluR5,448bp（上游:5’-GCTCATGGAGCAGATCAGC-3’,下游:5’-TGAAGAAC TCTGCGTGTAATC-3’）;β-actin为内参引物,300bp（上游5’-AGAGCTACGAGCTGCCTGAC-3’,下游:5’-AGTACTTGCGCTCAGGAGGA-3’）。取1μg总RNA,参照Takara公司RT-PCR试剂盒说明书进行,RT反应条件:42℃30min、99℃5min、5℃5min。反应体积为25μl,PCR反应条件:首先94℃4min,之后94℃1min,52℃1min、72℃90sec共扩增33个循环,最后72℃延伸10min。1.5%琼脂糖凝胶电泳后,电泳结果经Fluor ChemTMImaging System图像分析仪测定平均累积光密度值。2、免疫组织化学染色（SP法）检测mGluR1蛋白表达实验动物:Wistar大鼠和SERs均为2～3个月龄,在标准条件下饲养（12h交替照明,湿度为50%～70%,24℃）,动物可自由进食饮水,每组5只。步骤:大鼠脑组织的灌流固定,石蜡包埋,石蜡切片,抗原修复,一抗孵育,二抗孵育,DAB显色,图像采集与分析。3、Western blotting法检测mGluR1蛋白表达实验动物:Wistar大鼠和SERs均为2-3个月龄,在标准条件下饲养（12h交替照明,湿度为50%～70%,24℃）,动物可自由进食饮水,每组5只。步骤:膜蛋白提取,蛋白定量,SDS-PAGE凝胶电泳,PVDF转印,一抗孵育,二抗孵育,DAB显色,灰度扫描及分析。4、统计学分析实验结果采用Student-t检验,p＜0.05有统计学意义。实验结果1、半定量RT-PCR检测mGluR1 mRNA表达结果显示SERs海马中mGluR1的mRNA（0.76±0.15）表达低于Wistar大鼠（1.02±0.26）,p＜0.05,有统计学意义。2、免疫组化SP法检测SERs和Wistar鼠mGluR1蛋白表达mGluR1蛋白在两种鼠的海马各区均有分布,SERs海马各区单个阳性细胞上mGluR1蛋白密度较Wistar鼠的增强。SER海马DG区mGluR1阳性细胞数显著低于Wistar鼠,P＜0.01,有统计学意义;CA3区mGluR1阳性细胞数低于Wistar鼠,P＜0.05,有统计学意义;CA1区mGluR1阳性细胞数略低于Wistar鼠,P＞0.05,无统计学意义。3、Western blotting法检测mGluR1蛋白表达与免疫组化的结果一致,SERs海马中mGluR1蛋白表达总量较正常Wistar大鼠降低,P＜0.05,有统计学意义。结论1、SERs海马内mGluR1 mRNA总量表达下降。2、SERs海马内mGluR1总蛋白量减少。3、mGluR1阳性的神经细胞较正常鼠的增强,但总的阳性细胞数是下降的。