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目的明确DNMT1和EZH2在mi R-200b/a/429启动子区域相互作用协同调控启动子甲基化机制的存在,研究其调控mi R-200b/a/429表达下调机制,并探讨表观遗传学药物5-氮杂胞苷(5-Azacytidine)和DZNep对于肿瘤生长的影响。方法第一部分是选取胃腺癌细胞(MGC-803和BGC-823细胞)和胶质瘤细胞(U87细胞)作为研究对象,应用5-氮杂胞苷(5-Azacytidine)或DZNep分别作用于上述细胞系,提取各细胞株总RNA应用RT-PCR技术检测mi R-200b/a/429在处理前后的表达情况;将EZH2 si RNA或DNMT1 si RNA应用细胞转染技术导入细胞,提取各细胞株总RNA采用RT-PCR技术检测mi R-200b/a/429在处理前后的表达情况,提取经上述四种处理(5-氮杂胞苷、DZNep、EZH2 si RNA和DNMT1 si RNA)的各细胞株总蛋白采用免疫印迹(Western Blot)技术检测相关蛋白在蛋白水平的表达情况。第二部分应用co-IP技术检测EZH2和DNMT1在体内相互作用情况,CHIP分析DNMT1与mi R-200b/a/429启动子区域相互作用。第三部分是5-氮杂胞苷或DZNep作用于裸鼠动物模型分析其对肿瘤生长的影响,并运用免疫组化检测两种药物对相关蛋白表达的影响。结果1.组蛋白甲基转移酶抑制剂DZNep和EZH2 si RNA抑制组蛋白甲基化相关蛋白,如EZH2、EED、SUZ12,DNMT1及H3K27me3的表达并重新激活mi R-200b/a/429的表达。2.DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂胞苷(5-Azacytidine)和DNMT1 si RNA抑制EZH2、SUZ12、DNMT1和EED的表达并上调mi R-200b/a/429的表达。3.Co-Ip证实DNMT1与EZH2在体内天然结合,两者共同在体内甲基化调控中发挥作用。4.CHIP分析证实DNMT1结合于mi R-200b/a/429的启动子区域。5.在体内实验中,DZNep和5-氮杂胞苷(5-Azacytidine)抑制肿瘤生长,免疫组化结果显示DZNep和5-氮杂胞苷抑制EZH2、SUZ12等的表达。结论mi R-200b/a/429的表达调控中表观遗传学修饰发挥了重要作用。mi R-200b/a/429的表达水平与其基因启动子区域的甲基化水平存在密切的关系。DNMT1与EZH2的相互作用贡献于mi R-200b/a/429表达的下调,鉴于表观遗传学调控的复杂性,是否有其它蛋白或因子参与其中有待进一步研究探索。