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目的:经皮穿刺腔内冠状动脉成形术以及支架术是治疗冠心病的重要而有效的方法,已经成功应用多年,但支架植入术术后再狭窄(restenosis,RS)限制了它的发展。血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖和迁移是动脉粥样硬化和经皮腔内冠状动脉成形术及支架术术后再狭窄的发生发展的重要病理基础。药物洗脱支架(drug eluting stent,DES)的应用已使血管损伤后再狭窄率显著降低,随着治疗药物缓慢释放入血管壁,血管损伤后血管平滑肌细胞的增殖和迁移受到抑制,从而减少了血管重塑和支架植入后再狭窄。近年临床试验已经证实药物洗脱支架植入后再狭窄率为5–10%,而传统裸支架植入后再狭窄率为20–25%[1,2]。本研究观察小檗碱对体外血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法:用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养兔主动脉平滑肌细胞,传到8～10代,根据小檗碱作用时间不同分成24小时组和72小时组,每一时间组根据加入小檗碱的浓度不同分为5组: 0μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L组。不同浓度小檗碱作用24小时、72小时后分别用台盼蓝(trypan blue)溶液染色进行活细胞计数,并用四甲基偶氮唑蓝法(methylthiazoletrazolium,MTT)于酶标仪检测吸光度值,计算细胞生长抑制率,以观察药物对血管平滑肌细胞增殖的影响。不同浓度小檗碱作用后,用Boyden小室法检测穿过硝酸纤维素滤膜(cellulose nitrate membranes, CN)的细胞数,以观察小檗碱对血管平滑肌细胞迁移的影响。用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记方法(TUNEL)计算各浓度小檗碱作用后细胞凋亡阳性率,并用流式细胞仪检测细胞凋亡率,以观测小檗碱对血管平滑肌细胞凋亡的影响。结果:台盼蓝活细胞计数显示小檗碱作用24小时后,对照组、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L浓度小檗碱干预组活细胞数分别为3.51±0.54×108/L、2.65±0.03×108/L、2.17±0.04×108/L、1.76±0.01×108/L和1.68±0.05×108/L,各实验组与对照组相比有统计学意义(P<0.05),随小檗碱浓度增加,活细胞数减少。小檗碱作用72小时对照组、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L浓度小檗碱干预组活细胞数分别为5.39±0.94×108/L、3.64±0.03×108/L、2.40±0.06×108/L、2.16±0.04×108/L和2.01±0.07×108/L,各实验组与对照组相比有统计学意义(P<0.05),随小檗碱浓度增加,活细胞数减少。MTT法检测显示小檗碱作用24小时后,对照组、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L浓度小檗碱干预组A值分别为0.139±0.024、0.061±0.014、0.058±0.005、0.057±0.005和0.056±0.005,小檗碱作用72小时后,对照组、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L浓度小檗碱干预组A值分别为0.196±0.118、0.060±0.013、0.057±0.007、0.054±0.002和0.054±0.005,24小时、72小时各实验组与对照组相比有统计学意义(P<0.01),随小檗碱浓度增加,MTT A值增加。Boyden小室法检测显示小檗碱作用48小时后,对照组、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L浓度小檗碱干预组的穿膜细胞数分别为50.61±12.11个/高倍视野、31.23±2.61个/高倍视野、24.50±1.67个/高倍视野、20.39±2.25个/高倍视野和19.52±1.64个/高倍视野。各浓度小檗碱组对兔主动脉平滑肌细胞的迁移均有抑制作用(P<0.05),随小檗碱浓度增加,穿膜细胞数减少。TUNEL检测显示各组施加干预后48小时对照组、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L浓度小檗碱干预组的凋亡阳性率分别为13.15±1.83%、12.04±1.36%、10.62±1.21%、9.73±1.68%和9.72±1.16%,各浓度小檗碱组与对照组相比无显著差异性(P>0.05)。流式细胞仪检测小檗碱作用血管平滑肌细胞48小时后,对照组、50μmol/L和100μmol/L浓度小檗碱干预组细胞凋亡率分别为20.4 %、18.7 %和17.2 %。结论:与对照组相比,各浓度小檗碱组均使血管平滑肌细胞活细胞数减少, MTT A值增加,生长抑制率增高,随着小檗碱干预时间的延长,活细胞数减少,MTT A值增加,细胞生长抑制率增加。与对照组相比,各浓度小檗碱组均使血管平滑肌细胞穿膜细胞数减少,随小檗碱浓度增加,穿膜细胞数减少。与对照组相比,各浓度小檗碱组未使细胞凋亡率增加。小檗碱对血管平滑肌细胞的增殖和迁移有显著抑制作用,而小檗碱对血管平滑肌细胞的凋亡无促进作用。