研究背景　　 宫颈癌是仅次于乳腺癌导致女性发病和死亡最高的恶性肿瘤，超过80％的新诊断病例发生在经济情况比较差的地区。我国每年有新发病例约13万左右，约占全世界宫颈癌发病率的1/5。近40年由于宫颈细胞学筛查的普遍应用，使宫颈癌和癌前病变得以早期发现和及时治疗，宫颈癌的发病率和死亡率已有明显下降。其治疗是采用以手术和放疗为主，化疗为辅的综合治疗方案。早期宫颈癌的治疗效果较好，但Ⅳ期和复发性宫颈癌的5年生存率仅为3.2％～13％。复发大多数发生在诊断后2年内，预后差[1]，中位存活期是7个月。复发和转移患者生存率低的原因在于患者对宫颈癌的传统治疗手段往往不敏感。目前抗癌治疗方法之所以不能完全杀灭肿瘤细胞，很有可能是因为这些方法主要针对的是绝大多数已经分化的肿瘤细胞，而不能影响到耐药的肿瘤细胞，这其中包括肿瘤干细胞[2]。肿瘤干细胞与成体干细胞相似[3]，往往在药物治疗时处于休眠状态，即停止于细胞周期中的G0/G1期，从而得以存活，并在药物治疗后继续产生新的肿瘤细胞，导致癌症复发。　　 乙醛脱氢酶-1(Aldehyde dehydrogenase-1,ALDH-1)是细胞内乙醛氧化的解毒酶，人类存在ALDH-1A，ALDH-1B和ALDH-1C三种表型，这三种表型有94％的同源序列。ALDH-1在正常组织的干细胞中表达，通过将视黄醛氧化为视黄酸而参与干细胞的早期分化，是正常干细胞的特异标记物。国内外临床研究均发现，乳腺癌细胞也有少量细胞表达ALDH-1，且ALDH-1阳性患者预后差，并且与肿瘤的分级、ER/PR的状态、ERBB2的过表达以及细胞角蛋白形成密切相关[4,5]。在鼠和人的头颈部鳞癌的干细胞群、多发骨髓瘤和急性髓细胞样白血病的干细胞群中均发现ALDH-1活性升高[6，7]。利用ALDEFLUOR的试剂来分选乳腺癌ALDH-1阳性细胞，在裸鼠移植模型中，5X102个ALDH-1阳性细胞可形成移植瘤，而5X104个ALDH-1阴性细胞不能形成移植瘤。这些结果说明ALDH-1阳性的乳腺癌上皮细胞具有干细胞的活性，ALDH-1可以作为肿瘤干细胞(Cancer Stem Cells，CSCs)的特异标记物[4]。后来，关于ALDH-1与肿瘤干细胞的关系在不同肿瘤中也得到相关研究，如膀胱癌[8]、结肠癌[9]、非小细胞肺癌[10]。但目前国内外尚无关于宫颈癌干细胞的研究，依据以下事实推测宫颈癌与干细胞的相关性：(1)宫颈癌组织中有极少量细胞表面表达肿瘤干细胞分子标记物。(2)在CSCs中，调节正常干细胞自我更新的信号传导通路异常导致肿瘤干细胞增殖并形成肿瘤。(3)Kondo等[11]从C6神经胶质瘤细胞系中分离出占0.4％的SP细胞(side populationcell)。该类细胞在培养条件下可重新形成SP及non-SP细胞组群，亦可形成神经元及神经胶质细胞。将C6细胞植入小鼠体内，可观察到其恶性特征主要源自SP细胞。研究者同时也在宫颈癌Hela细胞系中分离出1.2％SP细胞。　　 综上所述，有关ALDH-1在宫颈癌(肿瘤干细胞)中表达的研究未见报道，本实验通过检测ALDH-1在宫颈癌组织中的表达情况，分析其与宫颈癌临床病理特征(年龄、病理类型，组织分级、肿瘤分期、深肌层浸润、脉管浸润、淋巴转移，术前放化疗)及预后的关系。从而初步探讨ALDH-1在宫颈癌组织中的表达情况以及临床意义，为今后宫颈癌肿瘤干细胞的研究提供方向。　　 研究目的：　　 1.研究肿瘤干细胞标志物乙醛脱氢酶-1(Aldehyde dehydrogenase-1，ALDH-1)在宫颈癌组织中的表达情况。　　 2.探讨ALDH-1与宫颈癌临床病理特征(年龄、病理类型，组织分级、肿瘤分期、脉管浸润、深肌层浸润、淋巴转移、术前放化疗)及预后的关系。　　 研究对象与方法：　　 1.研究对象：收集中山大学附属孙逸仙纪念医院2003年10月～2007年12月经手术治疗、有明确病理诊断的浸润性宫颈癌患者共198例，年龄24～67岁，平均44.55±8.72岁；其中术前无放/化112例，术前放/化疗86例(4例放疗，82例化疗)；鳞癌160例，腺癌38例；根据国际妇产科联盟(FIGO)2000年修订的宫颈癌分期标准，Ⅰ期135例(其中Ⅰ B1期58例，Ⅰ B2期77例)，Ⅱ期63例(其中Ⅱ a期49例，Ⅱ b期14例)；组织分级：高分化：31例，中分化：65例，低分化：102例；深肌层浸润(≥1/2)135例；脉管浸润75例；淋巴转移116例。全部患者随访至2009年4月，随访11～77个月，28例失访，随访率：85.86％，平均随访35.13±15.78个月。　　 2.实验方法：对每个宫颈癌标本行苏木素-伊红染色和非生物素二步法免疫组化染色。　　 3.统计学处理：使用SPSS17.0软件进行统计学处理，将数据做合理合并，分析ALDH-1与宫颈癌临床病理参数间的相关性采用x2检验，生存分析采用Kaplan-Meier法，用log-rank检验比较生存差异，采用COX比例风险模型分析预后因素。定义P＜0.05为差异有统计学意义。所有报告的P值均为双侧。　　 实验结果：　　 1.ALDH-1蛋白在浸润性宫颈癌组织中的表达情况：　　 在198例宫颈癌组织中，其中阴性表达有31例(15.66％)，低表达有129例(65.15％)，高表达有38例(19.19％)。　　 2.ALDH-1蛋白在术前无放/化疗组、术前放/化疗组的表达情况：　　 在术前无放/化疗组中，ALDH-1蛋白阳性93例(83.04％)，其中低表达68例(73.1％)，高表达25例(26.9％)；在术前放/化疗组中，ALDH-1蛋白阳性74例(86.07％)，其中低表达61例(82.4％)，高表达13例(17.6％)，两组间ALDH-1蛋白的表达无具有统计学差异(P＞0.05)。　　 3.术前无放/化疗组，ALDH-1蛋白表达与宫颈癌临床病理特征之间的关系：　　 ALDH-1的阳性表达与不同病理分级、深肌层浸润(≥1/2肌层)、淋巴转移均有关(P＜0.05)，与患者年龄、病理类型、临床分期、脉管浸润无关(P＞0.05)。　　 4.术前放/化疗组，ALDH-1蛋白表达与宫颈癌临床病理特征间的关系：　　 ALDH-1的阳性表达与不同临床分期、病理分级、深肌层浸润(≥1/2)、淋巴转移均有关(P＜0.05)，与患者年龄、病理类型、脉管浸润无关(P＞0.05)。　　 5.ALDH-1蛋白表达与宫颈癌无瘤生存期的关系：　　 ALDH-1蛋白表达阳性患者的无瘤生存期为(64.91±2.02)个月，低于ALDH-1蛋白阴性患者的无病生存期(68.58±1.40)个月，两者间的差异有统计学差异(P＜0.05)。　　 6.多因素COX比例风险模型的预后分析结果：　　 临床分期、病理分级、淋巴结转移、ALDH-1蛋白阳性表达是影响宫颈癌预后的主要危险因素(P＜0.05)。　　 结论：　　 1.大多数浸润性宫颈癌组织中有ALDH-1蛋白表达，但并非所有的宫颈癌细胞都表达ALDH-1，ALDH-1以低表达(＜30％)为主，这与肿瘤干细胞在肿瘤细胞中占小部分相符。　　 2.ALDH-1可作为宫颈癌肿瘤干细胞的特异标记物，作为判断宫颈癌预后的参考指标之一。