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[目的]
2型糖尿病(Type2 diabetes mellitus)是一种由多因素相互作用形成的常见的内分泌代谢疾病,在糖尿病的发病过程中胰岛素分泌起着非常重要的作用;以谷氨酸作为信使分子的胰岛素分泌系统称为谷氨酰胺能系统,这一系统是整个胰岛素分泌机制中的重要组成部分,而由囊泡谷氨酸转运子转运谷氨酸进入胰岛素分泌囊泡的过程是整个胰岛素分泌过程中的限速步骤。本课题从胰岛素对于小鼠VGLUT2(mVGLUT2)基因表达调控入手,观察这一调控机制在胰岛素调节β细胞功能中的作用,探讨这一作用对于胰岛素分泌的影响及其在2型糖尿病发生中的意义。
[方法]
在体外培养小鼠β细胞系MIN6,观察不同浓度的胰岛素水平作用下,利用promega公司的Dual-Luciferase Reporter Assay System检测mVGLUT2基因的启动子活性,利用Real-time PCR技术检测mVGLUT2基因mRNA表达水平,及利用westen blot检测mVGLUT2基因蛋白质水平的变化,初步确定胰岛素对mVGLUT2基因表达的调控作用及具体作用环节;最后利用酶联免疫吸附实验检测不同浓度的胰岛素水平作用时间下小鼠β细胞系MIN6细胞C-肽的分泌量,从而间接反映胰岛素对MIN6细胞的分泌作用的影响。
[结果]
胰岛素抑制了mVGLUT2启动子活性,mVGLUT2的mRNA表达水平及蛋白质表达水平下降,小鼠β细胞系MIN6的C-肽分泌功能下降。
[结论]
无糖条件下胰岛素抑制了mVGLUT2启动子活性表达,利用Real-time PCR技术检测mVGLUT2基因mRNA表达水平,及利用westen blot检测mVGLUT2基因蛋白质水平的变化,得出胰岛素反馈抑制mVGLUT2基因表达的最佳时间点。ELISA法检测细胞的C-肽分泌情况,间接反映小鼠β细胞系MIN6细胞的分泌功能下降;提示胰岛素对小鼠VGLUT2(mVGLUT2)基因调节有重要的抑制作用,探讨这一作用对于胰岛素分泌的影响及其在2型糖尿病发生中有重要意义。