论文部分内容阅读
子宫内膜异位症(Endometriosis,EM)是育龄妇女的常见病、难治病。它是指具有活性的子宫内膜出现在子宫腔以外所引起的一种病变。目前,EM发病机制尚不清楚,但是其作为一种雌激素依赖性疾病和炎症性疾病的观点已得到人们的普遍接受。近年来,作为内源性炎症反应“刹车信号”的脂氧素已被证实在炎症反应和雌激素信号途径中发挥着重要调节作用。虽然已有研究显示脂氧素可以抑制EM的发展,但是关于脂氧素在EM中的分子作用机理仍知之甚少。
本论文首先比较分析了EM患者和正常人中脂氧素受体ALXR的表达差异,证实脂氧素与内异症间存在联系。RT-PCR和免疫组织化学的结果表明,EM患者异位子宫内膜组织中ALXR的基因和蛋白表达水平都显著高于正常对照组。进一步采用RT-PCR、免疫细胞化学和免疫荧光化学等方法证实了人子宫内膜异位间质细胞(ESCs)中ALXR具有较高表达;Western blot的结果表明ESCs中ALXR的蛋白表达显著高于正常子宫内膜间质细胞。这些结果为脂氧素与内异症之间存在联系提供了证据。
为了研究脂氧素在EM中的抑制作用机理,本论文分别采用炎性刺激ESCs的体外细胞模型和EM小鼠的体内动物模型,研究阿司匹林诱生的脂氧素(ATL)的抗炎作用效应及其机理。结果表明,ATL能够显著抑制IL-1β和LPS诱导的ESCs中促炎细胞因子(IL-6、IL-8、MCP-1、TNF-α和VEGF)的基因和蛋白表达,采用ALXR拮抗剂Boc-2预处理ESCs后,ATL的这种抗炎效应被阻断,提示ALXR参与ATL的抗炎作用。体内实验中,ATL可以抑制EM小鼠异位病灶的生长,降低EM小鼠中IL-6、MCP-1和VEGF等炎性介质的基因和蛋白表达水平。另外,本文进一步从体外细胞实验研究了ATL对ESCs的迁移、侵袭和增殖能力以及雌激素代谢酶表达的影响。通过Real-time PCR、ELISA、明胶酶谱、细胞迁移实验、细胞侵袭实验等方法研究表明,ATL能够抑制IL-1β和LPS诱导的ESCs中MMP-9的表达和酶活性,降低ESCs的迁移和侵袭能力;通过流式细胞术和免疫细胞化学方法研究表明,ATL能够将ESCs细胞周期阻滞于G0/G1期,下调ESCs核内PCNA蛋白的合成,抑制细胞的增殖活性。通过Real-time PCR和Western blot方法研究表明,ATL能抑制IL-1β和LPs诱导的ESCs中COX-2、CYP19的表达并下调17β-HSD1/17β-HSD2的表达比值。
为了探讨内异症中p38 MAPK信号通路的作用以及ATL对p38 MAPK活性的影响,本论文首先研究了EM患者和正常人中磷酸化p38 MAPK的表达情况,结果表明,EM患者异位内膜病灶中p38 MAPK的磷酸化水平显著高于正常对照组;同样,ESCs中磷酸化p38 MAPK的表达也显著高于正常子宫内膜间质细胞。进一步研究发现,ATL能够降低EM小鼠腹腔免疫细胞和IL-1β诱导的ESCs中p38 MAPK的磷酸化水平;采用RNAi技术将ESCs中的ALXR进行沉默,结果表明ALXR的沉默阻断了ATL对p38MAPK磷酸化的抑制作用,提示对ATL对p38 MAPK信号通路的作用依赖于其受体ALXR。另外,研究还发现p38 MAPK特异性抑制剂SB203580可抑制EM小鼠异位病灶的生长,下调相关炎性介质(IL-1β、IL-6、MCP-1、TNF-α、VEGF)的表达,降低明胶酶(MMP-2和MMP-9)的表达和酶活性;SB203580还可抑制ESCs的增殖,下调IL-1β和LPS诱导的ESCs相关炎性介质(IL-6、IL-8、MCP-1、TNF-α、VEGF)、明胶酶(MMP-2和MMP-9)和局部雌激素代谢关键酶(COX-2、CYP19)的表达。
总结以上研究,ATL可能是在其受体ALXR的介导下,通过抑制p38 MAPK的活性,进而下调炎性细胞因子的水平,降低明胶酶的酶活性,减弱雌激素的合成,抑制异位子宫内膜细胞的迁移、侵袭、增殖,并最终抑制EM的发展。