硝酸菌norB基因的克隆、改组、表达及其活性研究

来源 :中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhbcaq
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硝化菌是一类能够将氨氮转化为硝酸盐氮的严格自养型微生物.其硝化作用是全球氮循环和污水处理厂的一个重要组成.硝化菌主要由两大生理群组成:氧化氨氮为亚硝酸盐氮的是亚硝酸菌;氧化亚硝酸盐氮为硝酸盐氮的是硝酸菌,硝酸菌中负责硝化作用的酶是亚硝酸氧化还原酶,这个酶由norB等基因编码,因而对这个酶和基因的研究将有助于氮污染的控制和防治.通过富集培养和平板划线分离技术,该研究从土壤,污水中筛选获得了15株微生物.依次命名为X01-X15.这15株细菌均为革兰氏阴性菌.在1000倍显微镜下为杆状或球状.在28℃培养时,这15株微生物大多形成淡黄色,细小菌落,将细菌接种于硝酸菌无机盐培养基中,经过黑暗28℃培养后,测其硝化速率,发现这15株菌均能够利用亚硝酸盐,其硝化速率在4.4-5.0mg/Lod之间.而大肠杆菌则不能利用亚硝酸盐氮,其硝化速率为零,为了进一步对所筛选到的微生物进行鉴定.该研究又通过电镜观察了15株细菌的细胞膜结构.研究发现,15株细菌中有13株具有比较复杂的细胞膜结构,这是硝酸菌的典型特征.该研究经过筛选获得了15株硝酸菌,对norB基因克隆,测序,改组,表达后,筛选到了一株硝化效率比较强的菌株,并表达出了预期蛋白.该研究为深入研究硝酸菌及提高硝酸菌处理含氮废水的效率提供理论依据.
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