磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol3-Kinase,P13K)是细胞信号通路中一大类脂激酶家族,P13K/AKT信号通路的活化在很多类型的肿瘤中都会导致异常的细胞增生。PIK3CA基因编码ⅠA类P13K催化亚基p100α,研究发现它在多种人类肿瘤中发生功能性突变,导致P13K激酶活性增加,进而导致整个信号通路活化,因此PIK3CA基因突变被认为在肿瘤治疗中有预测预后功能,并可以作为药物开发的靶点。随着越来越多P13K信号通路靶向抑制剂的开发,对于PIK3CA基因突变的检测变得越来越重要。本研究利用分子生物学的方法,基于实时PCR平台建立检测体系检测PIK3CA基因外显子9及外显子20上的突变,为PIK3CA基因突变的检测提供新策略。　　 第一章,首先介绍了P13K/AKT信号通路在肿瘤发生发展中的作用,随后介绍了PIK3CA基因以及其突变的分子生物学意义和临床意义,最后介绍了PIK3CA基因突变的检测方法并提出了本研究所开发的两种新策略。　　 第二章,介绍了改良分子信标探针熔解曲线分析方法的建立,该方法相较于直接测序法提高了突变检测灵敏度,对于PIK3CA基因突变的检测较全面,且具有快速,简便,易于实现高通量检测的特点,并且避免了22q11.2同源基因(98％)的扩增使得检测更准确。本检测体系对于突变DNA的选择性可达55～10％,灵敏度可达30拷贝/反应,体系特异性及重复性良好。在对122份肿瘤组织标本检测中结直肠癌标本检出突变8份(8/94.8.5％),乳腺癌标本检出突变11份(11/28,39.3％),测序验证中除3份突变标本测序为野生外其余均与测序结果一致,说明本检测方法较测序更为灵敏。　　 第三章,针对3个热点突变建立单管多重ARMS探针熔解曲线分析方法,该方法的特异性.ARMS引物对突变起到富集作用,提高了野生背景下的突变检测灵敏度,与前章所介绍的方法相互补充,相互验证。本体系对于突变DNA的选择性可达0.5％,灵敏度可达30拷贝/反应,体系特异性及重复性良好。在对122份肿瘤组织标本检测中结直肠癌中检出热点突变8份(8/94,8.5％),乳腺癌中检出热点突变10份(10/28,35.7％),测序验证中除5份突变标本测序为野生外其余均与测序结果一致,且此5份中的3份为普通体系检出突变而测序野生的标本,显示了ARMS体系突变检测更为灵敏的优点。