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以湿加松和火炬松嫩芽为材料,在离体条件下诱导出大量不定芽,并进行分化、伸长和生根培养,获得了再生小植株;以杉木半木质化嫩枝为外植体,诱导出大量腋芽和丛生芽,并进行生根诱导,获得了再生植株。探索出湿加松、火炬松和杉木微体快繁的有效途径。其主要结论如下:
1、以嫩芽为外植体初步建立了湿加松组织培养植株再生体系研究了基本培养基、激素、大量元素对湿加松不定芽增殖和伸长的作用。结果表明,TE+BA1.0mg· L<-1>+NAA0.05mg/L时不定芽诱导率达83.8%,不定芽增殖率达232.4%。培养基中大量元素的浓度对不定芽增殖的影响较大,在1.25TE+BA1.0mg· L<-1>+NAA0.05mg· L<-1>培养基中,不定芽诱导率达96.7%,增殖率达320%。湿加松不定芽诱导频率及平均每外植体产芽数达到最高,但芽体较小,生长缓慢,经以TE为基本培养基,不加任何激素的培养基中培养,不定芽生长较快。
将伸长的嫩梢切下置于以1/2TE为基本培养基的生根培养基中,培养20d左右便有不定根的分化。以IBA单独处理,浓度为1.0 mg· L<-1>时根茎连接处愈伤组织较少,生根率达65%,平均根数为1.8条;生长素和细胞分裂素组合处理,IBA2.0mg· L<-1>+NAA0.05mg· L<-1>+BA0.05mg· L<-1>诱导湿加松生根率54.2%,平均根数为2.1条;加入活性炭处理,湿加松不定芽接种在添加IBA1.0mg· L<-1>和0.1%活性炭培养基中没有不定根发生。再生植株移栽存活率为26%。
2、以嫩芽为外植体初步建立了火炬松组织培养植株再生体系以火炬松嫩芽为外植体,以TE为基本培养基,添加BA1.0mg· L<-1>及NAA0.05mg· L<-1>,不定芽的诱导率能达75%以上,增殖率达163%。在丛生芽生长的过程中,加入NAA0.01~0.05mg· L<-1>,有利于芽的伸长。不同培养基对火炬松诱导生根的影响差异较大,火炬松嫩梢能在1/2改良GD、1/2DCR和1/2TE培养基上生根。试验表明火炬松不定芽在1/2TE培养基上的生根率明显比其它两种培养基上高,故选用1/2TE为火炬松生根诱导基本培养基。火炬松嫩梢在1/2TE+IBA4.0mg· L<-1>培养基中,不定芽生根率可达46.7%。在生根诱导培养基中加入0.1%活性炭后,没有不定根产生。火炬松再生植株移栽成活率为38%。
3、以半木质化嫩枝为外植体初步建立了杉木组织培养植株再生体系培养基中单独添加BA即可诱导杉木腋芽和丛生芽的发生,不定芽诱导率随着BA浓度增加而降低,浓度越高越不利于芽诱导。为了抑制顶端效应,将高2~4cm的杉木不定芽切成两段,对切下来的茎段进行腋芽诱导,接入的材料10d左右腋芽开始萌动,在叶腋处有绿色结节突起,腋芽诱导可达到100%。试验表明,DCR+BA0.75mg/L+NAA0.025mg/L对腋芽的诱导增殖率最大,达560%,腋芽平均高为5.3mm。而在不加入任何激素的培养基中诱导多为单腋芽,腋芽生长快,两个月后诱导的腋芽平均高可达13.2mm,最高腋芽为42.0mm。
生长素种类和浓度对杉木生根有较大影响。1/2TE基本培养基中单独添加NAA、IBA即可诱导杉木芽生根,浓度分别为2.0mg/L、3.0mg/L时,生根率达100%。同时试验以1/2TE+IBA1.0mg/L,一种处理添加0.1%活性炭,另一种不加活性炭。结果表明,不加活性炭的生根培养基中有不定根发生,生根率可达65%;在含有活性炭的生根培养基中不能诱导不定根发生。但活性炭有利于腋芽的诱导,一个月芽诱导率可达80%,此时芽最高可达15.0mm,同时也有利于芽的伸长。杉木再生植株移栽成活率为33%。