三氧化二砷对腺样囊性癌ACC-2细胞ACIN1基因表达的影响

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目的:研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对体外培养的腺样囊性癌细胞株ACC-2细胞的生长影响及诱导凋亡作用,对ACIN1基因及蛋白表达的影响,探讨其抑制ACC-2细胞生长和诱导凋亡的作用机制,为As2O3应用于ACC动物实验及治疗提供依据。  方法:体外培养腺样囊性癌ACC-2细胞,分为实验组和空白对照组,实验组于细胞指数生长期加入不同浓度梯度(2.0、4.0、6.0、8.0μmol/L)的含As2O3细胞培养液,对照组仅给予等量全细胞培养液,加刺激后分别培养12h、24h、36h、48h,并持续观察各时间点不同浓度As2O3对腺样囊性癌ACC-2细胞的生长抑制作用和细胞凋亡的形态变化,应用荧光定量RT-PCR和免疫细胞化学技术检测ACIN1基因和蛋白的表达变化。  结果:(1)As2O3对ACC-2细胞的生长具有抑制作用,且随着药物浓度的升高及作用时间的延长,细胞的生长抑制作用逐渐加强,即呈现时间-浓度依赖性,显微镜下可见细胞变小变圆,细胞接触减少,细胞间隙变大,胞内颗粒增多,细胞核固缩,细胞密度增大并有空泡样变,贴壁细胞减少,悬浮细胞逐渐增多,即大部分细胞呈现凋亡状态。  (2)RT-PCR结果显示ACIN1 mRNA在空白对照组和实验组ACC-2细胞中均存在表达,随着As2O3浓度的增加和作用时间的延长,其表达量略有下降,但不同浓度及时间点总体比较差异均无统计学意义(P>0.05);不同时间两两比较均无统计学差异(P>0.05),不同浓度仅6.0、8.0与空白对照组两两比较有统计学差异(P<0.05)。  (3)免疫细胞化学检测结果示ACIN1蛋白在细胞核和细胞浆均有表达,以细胞核为主,ACIN1蛋白在对照组ACC-2细胞中存在基础表达,不同浓度As2O3作用于ACC-2细胞后,随浓度及作用时间增加,阳性颗粒逐渐向细胞核聚集并增强,平均光密度值  (IOD/area)逐渐增大,不同浓度、处理时间总体比较ACIN1蛋白表达量差异有统计学意义且浓度和时间具有协同效应(P<0.01);两两比较,不同浓度比较差异均有统计学意义(P<0.01),不同时间除36h与48h外其余均有统计学差异(P<0.05),这与PCR结果不同。  结论:(1)As2O3对体外培养的ACC-2细胞具有生长抑制和诱导凋亡作用。(2)ACIN1仅在蛋白水平参与As2O3诱导ACC-2细胞的凋亡,其不同功能的转变依赖于细胞状态及其他凋亡因子的水平和上游激活信号。
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