【摘 要】
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β-环糊精葡基转移酶(Cyclodextrin Glucanotransferase,简称CGTase,E.C.2.4.1.19)属于α-淀粉酶家族,能够催化淀粉及相关基质进行分子间转糖基反应合成环糊精(Cyclodextrin,CD)。 本文
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β-环糊精葡基转移酶(Cyclodextrin Glucanotransferase,简称CGTase,E.C.2.4.1.19)属于α-淀粉酶家族,能够催化淀粉及相关基质进行分子间转糖基反应合成环糊精(Cyclodextrin,CD)。
本文对一株基因工程菌E.coli BL21(DE3)产β-环糊精葡基转移酶的培养基和发酵条件以及该酶的分离纯化进行了系统的研究。并且,对该酶在降低小鼠血糖方面的作用进行了初步探讨。
1.利用单因素和正交试验优化了基因工程菌E.coli BL21(DE3)菌株的产酶的最佳培养基配方,并确定了产酶的最佳培养条件:培养基的组成为玉米粉1.5%,玉米浆6%,蛋白胨1.0%,接种量3%,培养温度37℃,培养基初始pH8.0;摇瓶发酵培养:500 ml三角瓶装液量为50 ml,210 r/min振荡培养,其发酵液酶活可达5010 U/mL;在发酵罐中的最佳发酵条件:搅拌速度为200 r/min,通气量为1 L/min。
2.β-环糊精葡基转移酶的粗酶液经过淀粉-硫酸铵沉淀初步纯化,然后经Sephacryl S-100凝胶层析后,比活力分别提高了18倍和36倍,由初始122.5 U/mg蛋白质增加到4429 U/mg蛋白质,回收率分别为64.1%、35.2%,经SDS-PAGE电泳显示为单一的蛋白带。
3.以β-环糊精葡基转移酶为受试物,通过灌胃和腹腔给药两种方式,研究β-环糊精葡基转移酶对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠血糖的影响,确定其有效作用方式和对小白鼠糖耐量和肝糖原的影响。结果显示,β-环糊精葡基转移酶灌胃给药,100 mg/kg、200 mg/kg对血糖无明显影响。β-环糊精葡基转移酶腹腔给药,不同剂量0.1mg/kg、1.0 mg/kg、10 mg/kg都可使血糖明显下降,下降百分率分别为45.4%、51.2%、43.1%;结果还显示:β-环糊精葡基转移酶可显著改善高血糖小鼠的糖耐量和增加高血糖小鼠的肝糖原含量,其作用效果与胰岛素效果相当。
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