抗哮喘中药单体调节PTEN通路的研究

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[目的]  利用PTEN启动子荧光素酶报告基因建立体外筛选中药单体的模型,并由此筛选出具有上调PTEN表达的中药单体,将中药单体应用于哮喘动物体内证实单体的抗哮喘作用是通过上调PTEN实现的。  [方法]  通过PCR扩增PTEN启动子,连接到pGL3载体中,构建PTEN荧光素酶报告基因,将此荧光报告基因转染入A549细胞,24h后加入中药单体,观察中药单体对PTEN启动子荧光素酶报告基因的调节作用;将所筛选出的具有上调PTEN表达作用的中药单体用于治疗BALB/C哮喘小鼠,通过肺组织病理分析、免疫组化、荧光定量PCR分析PTEN在哮喘小鼠体内的表达以及中药单体对哮喘的治疗作用。  [结果]  1.PTEN荧光素酶报告基因的建立  成功建立PTEN启动子荧光素酶报告基因,荧光素酶活性的变化反映了PTEN转录的变化。  2.中药单体的筛选  利用PTEN启动子荧光素酶报告基因,从61种候选中药单体中筛选到1种能显著上调PTEN表达的中药单体-白藜芦醇,白藜芦醇作用于转染的A549细胞后,PTEN启动子转录活性上调了2.2倍。  3.PTEN蛋白和mRNA在小鼠肺组织内的表达  PTEN蛋白和mRNA在哮喘小鼠肺组织内较正常对照组显著下降(P<0.01);经白藜芦醇治疗后,小鼠体内PTEN蛋白和mRNA明显恢复到正常水平,与哮喘模型组比较,有明显统计学意义(P<0.01)。  4.白藜芦醇在哮喘小鼠体内的抗哮喘作用  经鸡卵白蛋白OVA致敏和激发后的小鼠,按体重给予腹腔注射30mg/kg的白藜芦醇治疗一周,肺组织病理损害程度较哮喘模型组小鼠明显改善,气道中嗜酸性粒细胞、中性粒细胞等炎性细胞数目降低,气道上皮粘膜层厚度、气道平滑肌厚度、气道内壁厚度均较哮喘模型组降低(P<0.05),有统计学意义。  [结论]  1.PTEN荧光素酶报告基因是体外筛选具有调节PTEN表达的中药单体的有效工具,从而为筛选抗哮喘中药单体提供途径和方法。  2.白藜芦醇在哮喘小鼠动物模型体内能有效治疗哮喘,其途径可能是通过上调PTEN的表达实现的。
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