黄孢原毛平革菌产锰过氧化物酶代谢及农杆菌介导的真菌转化研究

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黄孢原毛平革菌是白腐真菌中研究较多的一类模式菌,它所分泌的木质素降解酶包括锰过氧化物酶(MnP)能降解木质素、芳香族类等环境污染物;里氏木霉是生产纤维素酶的重要菌株,两者都具有较高的研究及应用价值。  本文初步研究了孢子接种量、Tween80、碳源及氮源的添加量以及剪切力等因素对黄孢原毛平革菌产MnP的影响方式。结果表明接种量为105个/mL孢子时,MnP酶活最高;添加1g/L的Tween80不仅能保护酶免受剪切力的破坏,还可以促进MnP的分泌;葡萄糖的添加量对MnP的影响不大,但有利于MnP酶活的维持;剪切力的增大会延迟MnP的分泌以及产量,主要是影响菌球形态。以pCAMBIA1300为骨架,构建了启动子分别为CaMV35S(花椰菜花叶病毒35S启动子)、pki(丙酮酸激酶基因启动子)、gpd(变色栓菌甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因启动子)、gpdA(构巢曲霉甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因启动子),并外源引入vgb(透明颤菌血红蛋白基因)的四个双元载体,借助根癌农杆菌GV3101,LBA4404和EHA105的介导,转染黄孢原毛平革菌和里氏木霉。结果含pki和gpd启动子的双元载体成功转化了里氏木霉,PCR及RT-PCR鉴定结果表明vgb基因已成功转录,所挑取的21株里氏木霉转化子在静止培养条件下,菌体干重相比野生菌提高了17-28倍,静止条件下的滤纸酶活FPA也有不同程度的提高。
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