葫芦素B对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

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神经母细胞瘤(Neuroblastoma,NB)是一种胚胎性恶性肿瘤,是儿童最常见的颅外实体肿瘤之一。神经母细胞瘤在婴幼儿中的发病率及死亡率高,预后差。目前为止,尚未有十分行之有效的治疗方法。葫芦素B(cucurbitacin B, CuB)是一种中药,具有抗肿瘤、保肝、提高机体免疫力等多种作用,近年来其抑制肿瘤的作用逐步成为研究热点,但其抗肿瘤的机制尚未揭示。本文以人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞为研究材料,运用MTT、PI染色、Annexin V-FITC/PI染色、流式细胞术、RT-PCR、Western blot等方法研究CuB对SH-SY5Y细胞增殖的影响,为CuB预防和治疗神经母细胞瘤提供理论基础。主要研究结果如下:  (1)CuB能有效抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖。MTT检测结果表明,随着时间和浓度的增加,CuB对SH-SY5Y细胞的抑制作用增强;CuB作用24h的半抑制浓度为8μM。  (2) CuB对SH-SY5Y细胞G2/M期进行阻滞。通过不同浓度梯度的CuB处理神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞24h后,运用流式细胞仪检测细胞的周期情况,随着药物浓度的增加表现出明显的G2/M期阻滞;此外,不同浓度的CuB处理SH-SY5Y细胞24h后,ROS明显升高。  (3)RT-PCR结果显示CuB呈时间和剂量依赖性抑制G2/M期关键基因CyclinB1, CDK1和抗基凋亡因 Bcl-2转录水平的表达,活化促凋亡基因Bax转录水平的表达;Westernblot结果表明CuB抑制周期关键蛋白CyclinB1, CDK1和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,活化促凋亡蛋白Bax的表达,亦呈时间和剂量依赖性;RT-PCR和Western blot均证明CuB有促进SH-SY5Y细胞凋亡的效果。  本实验结果表明,CuB有着显著的抗肿瘤效果,其抑制作用是通过细胞周期阻滞和诱导凋亡引起的,从而为抗小儿神经母细胞瘤药物的研发提供了一种新的思路。
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