AGL基因编码的糖原脱脂酶是参与糖原降解的一种复合酶,包括α-葡聚糖转移酶和淀粉-1,6-葡糖苷酶、脱支酶两种功能。目前,人和马的AGL基因的研究主要集中于结构和功能。有关于猪AGL基因的研究报道比较少。本文以猪AGL 5’侧翼序列为研究对象,探讨5’侧翼序列的启动子活性,主要研究结果如下：猪AGL 5’侧翼序列启动子活性研究构建AGL 5’侧翼序列驱动的虫荧光素酶基因表达质粒pGL3-5’UTR,转染L02细胞。转染48h后用双荧光素酶报告基因检测试剂盒,检测荧光素酶的表达情况；转染24h后用逆转录聚合酶反应检测虫荧光素酶基因mRNA水平。与阴性对照pGL3-basic作比较,pGL3-5’UTR有显著的虫荧光素酶表达(P<0.01)；反转录PCR反应也得到相符的结果,pGL3-5’UTR检测到虫荧光素酶基因mRNA。结果表明,AGL 5’侧翼序列具有成熟的启动子活性,能够启动下游基因的表达。猪AGL 5’侧翼序列启动子活性的结构定位利用生物信息学方法对5’末端非编码区进行分析,该序列中存在TATA框、CAAT框、GC框和一些可能的转录因子结合位点,如Smad3、Smad4、C/EBPβ、MAZF、USF、SP1、AP-2、MEF2、MyoD和HNF-3p/foxa2等。以pGL3-5’UTR为模板构建系列缺失表达载体,转染L02和C2C12细胞,进行双荧光素酶报告基因检测和反转录PCR反应检测。与阴性对照pGL3-basic相比,pGL3-233、pGL3-416、pGL3-495、pGL3-607和pGL3-690都具有明显的启动子活性。pGL3-416的活性显著高于pGL3-233 (P<0.05); pGL3-690的活性显著高于pGL3-607 (P<0.05)=反转录PCR反应结果与之相符。结果显示,AGL 5’侧翼序列翻译起始位点上游218bp开始具有基本启动子活性；-411--228bp和-685--602bp的区段内可能有非常重要的顺势作用元件。-412--229bp序列分析表明,发现该区段含有HNF-3β保守结合位点。利用重叠延伸PCR技术,以pGL3-690为模板,对HNF-3β结合序列进行突变,构建突变表达载体pGL3-△-690。分别转染L02和C2C12细胞,与pGL3-690相比,pGL3-△-690活性分别下降98%和84%,结果提示,HNF-3β在AGL的转录调控过程中发挥重要的作用。猪AGL 5’侧翼序列启动子活性的组织表达特异性选取具有较高转录活性的pGL3-690和pGL3-5’UTR载体,分别转染L02和C2C12细胞。结果显示,pGL3-5’UTR和pGL3-690在细胞系C2C12中的活性比在细胞系L02中的高,但差异不显著。结果提示,5’UTR和690这两段序列的转录活性不具有组织特异性,AGL5’侧翼序列转录活性的组织特异性有待进一步研究。