水稻、小麦中一种直接操控蛋白水平的方法的建立

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后基因组时代生物学研究的一个主要任务就是解析所有蛋白质的功能。在生物体中扰动特定蛋白质的表达水平,然后观察后续表型是研究蛋白质功能的主要手段。在植物生物学研究中,目前的方法是在DNA或RNA层面对蛋白质水平进行操纵。因而,这些方法对蛋白质的操控是间接的,需要相对长的时间起作用并引发相应的表型。此外,蛋白质本身的稳定性以及翻译后修饰也会影响这些方法的实际效果。对于蛋白质水平的直接操控能让我们更加高效、快速地解析蛋白的功能。在模式植物拟南芥中已经建立了一种利用小分子化合物Shield1(Shld1)直接操控目标蛋白质积累水平的技术体系--RDDK-Shld1系统。然而,相应的方法在水稻、小麦等重要经济作物中还没有建立。水稻、小麦中蛋白精细调控技术体系的建立,将为作物基因功能的研究和转基因育种提供重要的技术支撑。  本论文中,我们证实RDDK-Shld1系统在水稻和小麦中能够直接操控蛋白质水平。在水稻和小麦中均没有检测到RDDK融合蛋白的渗漏积累,显示了RDDK-Shld1系统在单子叶植物中的严谨性。Shld1处理能诱导水稻和小麦中RDDK融合蛋白的积累,且融合蛋白的积累水平随着Shld1施加浓度的提高而上升,说明RDDK-Sh1d1系统在水稻和小麦中可以对蛋白质积累水平进行直接操控。有趣的是,Shld1处理3小时后,RDDK融合蛋白在水稻中开始积累,并在处理后9小时左右积累水平达到最高,而在处理24小时后RDDK融合蛋白水平则降低至无法检测。此外,研究还发现RDDK融合蛋白只在Sh1d1处理的部位积累,在系统部位不积累。以上结果表明,使用RDDK-Shld1系统可以对目标蛋白的积累实现精确的时空操控。进一步研究发现,植物外源的抗除草剂蛋白Bar和内源的稻瘟病抗病蛋白PID3的积累都能通过RDDK-Shld1系统进行操控。在Shld1的诱导下,RDDK-Bar和RDDK-PID3融合蛋白能够分别使相应的转基因植物具备除草剂抗性和稻瘟菌抗性。综上所述,我们的工作证明RDDK-Shld1系统可以成为作物蛋白功能研究和转基因表达时空调控的一个重要工具。
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