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利用基因工程手段生产重组蛋白药物是当代生物技术的重要研究内容。本论文通过研究影响重组蛋白表达量的因素及调控策略,以达到提高目标蛋白表达量的最终目的,从而提高基因工程产物在市场上的竞争力。
首先,在摇瓶中对两种重组大肠杆菌表达外源蛋白进行了优化:
(1)通过添加半胱氨酸,优化培养基有机氮源成分,选择合适的诱导方式,最终使重组人胰岛素原蛋白的表达量由1.9%提高至20%。
(2)通过单因子实验与响应面法相结合的方法,优化了总TRAIL蛋白的表达条件。总TRAIL蛋白的表达量能够提高到27%以上,可溶性TRAIL的表达量达到17.1%。
其次,在3.71发酵罐中对重组人胰岛素原和可溶性TRAIL进行中试放大:
(1)低密度时(菌体OD600为20.5),重组人胰岛素原的表达量达到19.5%;而当菌体OD600为84.6时,重组人胰岛素原的表达量为13.4%;
(2)通过补料-分批发酵进行高密度培养,最终获得可溶性TRAIL蛋白产量1.56 g/1,且生产效率提高了两倍。在一定条件下,表达的TRAIL蛋白中可溶性成分可达71%,可大大简化后续加工步骤。