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本研究以12种植物病原真菌作为供试病菌,以7种芸香科植物作为供试植物,采用菌丝生长速率法测定了各个供试植物提取物对供试病菌的抑制活性,根据活性跟踪,确定了活性化合物为(E)-N-2-Phenylethylcinnamamide。
在10mg/mL的浓度下,分别测定了黄皮(Clausena lansium(Lour.)Skeels)、九里香(Murraya exotica L f.sp.)、蜜橘(Citrus f.sp.)、柚(Citrus macima(Burm)Merr.)、脐橙(Navel orange f.sp.)、三叉苦(Navel lepta(Spreng.)Merr)和花椒(Zanthoxylum bungeanum)等7种芸香科植物甲醇粗提物对葱紫斑病菌(Alternaria porii)、白菜黑斑病菌(Alternaria brassicae)、玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)、玉米茎基腐病菌 (Fusarium roseum f.sp.cerealis)、棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)、棉花枯萎病菌 (Fsarium oxysporum f..sp.vasinfectum)、小麦根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)、稻瘟病菌(Pyricularia grisea)、香蕉炭疽病菌(Rhizoctonia solani)、香蕉炭疽病菌 (Colletotrchum musae)、辣椒炭疽病菌(Colletotrichum capsici)和西瓜枯萎病菌 (Fusarium oxysporum f.sp.niveum)等12种病原真菌菌丝生长的活性,结果表明,黄皮提取物对香蕉炭疽病菌的抑制效果最好,抑制率达到了85.53%。
确立了天然源物质带毒培养基配制的最佳方案,即用10%丙酮溶解天然源物质,再与马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基以1:9(V:V)的比例混合均匀,配制成带毒培养基。
对黄皮的花、果核、枝叶和树皮进行索氏提取,并将其甲醇提取物进行活性测定。结果表明,枝叶的提取率最高,为28.78%,树皮、果核和花索的提取率分别为21.23%、24.54%和14.70%。在10mg/mL的浓度下,黄皮果核甲醇提取物对香蕉炭疽病菌的抑制率为88.83%,本实验确定选用黄皮果核甲醇提取物进行抑菌活性的研究。
黄皮甲醇粗提物对香蕉炭疽病菌菌丝生长均有较好的抑制作用,EC<,50>值分别为4.34mg/mL。
采用液-液分配萃取法对黄皮甲醇提取物进行初步分离,得到石油醚相、三氯甲烷相、乙酸乙酯相、正丁醇相、水相等萃取物,对香蕉炭疽病菌活性研究表明,在5mg/mL的浓度下,氯仿萃取相的活性显著高于其他萃取相,抑制率为86.11%。黄皮果核甲醇粗提物氯仿萃取相对香蕉炭疽病菌菌丝生长抑制率与处理浓度成正相关,EC<,60>值为2.37mg/mL。
氯仿相硅胶柱层析分离得到12个流分,在2mg/mL浓度下,流分A18--29对香蕉炭疽病菌菌丝生长抑制率为78.10%,显著高于其他流分。
流分A18--29硅胶柱层析分离得到9个流分,在1mg/mL浓度下,流分B22--28对香蕉炭疽病菌菌丝生长的抑制率为73.32%,显著高于其他流分。
流分B22--28硅胶柱层析分离得到6个流分,在0.5mg/mL的浓度下,流分C6-8对香蕉炭疽病菌菌丝生长的抑制率为71.18%,显著高于其他流分。
流分C6-8凝胶柱层析分离得到白色针状结晶,经过核磁共振波谱检测,确定该化合物为(E)-N-2-Phenylethylcinnamamide。
通过高效液相色谱仪测定了该化合物在黄皮植株的果核、树皮、枝叶和花索中的含量,结果表明,化合物(E)-N-2-Phenylethylcinnamamide在花索粗提物中的含量较少,仅为0.33%,在枝叶、树皮和果核中的含量分别为1.26%、0.94%和1.39%。
本论文还对芸香科植物及该科黄皮的应用前景和天然源物质带毒培养基的配制进行了讨论。