食管癌DNA倍体类型与预后的关系

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目的:食管癌是威胁人类生命健康的一种恶性肿瘤,约半数患者确诊时已失去根治性切除机会,超过95﹪的患者就诊时己属临床中、晚期,虽经手术切除其疗效仍不满意.手术治疗后复发转移是影响其疗效的主要原因.预见食管癌的复发转移危险性,从而加强对高危患者的辅助治疗和随访,以便早期发现复发加强进一步的治疗,这样就有希望提高患者的治愈率及生存率.方法:1病例的选择:选1990~1996年间保定市第三医院胸外科行食管癌根治病人的存档石蜡包埋组织块共74例,人选病例均符合下述条件:(1)随访年限最短者不少于五年,如少于五年为己知确实亡,并且死于食管癌复发或转移.(2)均为原发性食管癌并首次行外科治疗者.(3)手术时均没有远处脏器转移.及周围脏器受侵(无T4).()均行食管癌根治术(清扫相应淋巴结),并有确切的病理诊断.(5)均没有接受术前辅助性放疗和化疗,(6)取每例病人肿瘤上端或下端的正常食管石蜡包埋组织作为DNA检测的内部参考标准.2 单细胞悬液的制备:食管癌病人术后标本,肿物及其上端或下端正常食管粘膜的石蜡包埋组织块共148例,每例切取5μm切片一张,作HWE色,由同一病理医师复查病理诊断及分级,同时每例切取40μm切片4—5张置于10ml玻璃离心管内.3 细胞悬液DNA染色上机前将正常食管粘膜组织的单细胞悬液加入至食管癌组织的单细胞悬液中同步进行DNA 染色:每管加入0.1ml﹪ RNA酶2ml,370C水浴振荡10分钟,离心,然后加入5μg/ml碘化丙陡1ml,静置染色30分钟上机检测,染色在0—4℃下进行.4DNA 含量测定方法使用荧光激活细胞分选仪(FACS420型)以波长488nm,功率为300mW氢 离子激光作激发光源,细胞发出的荧光信号以组方图或点阵图及数字表的形式在多道脉冲分析仪上显示.所得数据经计算机处理,调整仪器的CV值,使稳定在3﹪-5﹪之间.5 结果的判定标准肿瘤细胞倍体性的确定按Frieellander标准,即二倍体肿瘤只有单一的G<,1>峰,如果直方图中还有额外的G<,1>峰,那么可确定为异倍体.以D指数(DNAIndex,DI)表示DNA含量,DI等于肿瘤细胞G<,0>/G<,1>峰的均道值除以正常细胞的DNA含量的Go/G<,1>峰均道值.将细胞周期分为Go/G<,1>、S、G<,2>M期,细胞周期时相分布的计算采用价款加宽矩形拟合模型,并计算PI值:PI:S+G<,2>M/Go/G<1>+S+G<,2>M,所得数据经X<2>检验或t检验进行统计学分析.结论:该实验研究结果证明,食管癌DNA 倍体分析可以作为判定手术治疗食管癌患者预后的一个客观指标,是对临床分期及病理组织学分级的一个极有价值的补充指标.
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