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目的:脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)是一种常见的神经系统疾病,其死亡率较高,大约有半数病人于发病数日内死亡,幸存者中多留有不同程度的后遗症,对病人的生存质量产生了巨大影响。随着治疗方法的进步,对ICH的处理已经不仅仅局限在手术清除血肿、挽救生命方面;如何减少神经细胞的凋亡,减轻ICH对脑组织的损伤,降低脑出血患者致死及病残率,提高治愈率是当前脑血管疾病防治的重要研究课题之一。ICH后的继发性脑损伤(主要是神经细胞的损害)的机制是多方面的,其中在脑出血后神经损伤的发展中起着重要作用的有:基质金属蛋白酶2、炎症细胞因子、微管相关蛋白-2、血管内皮细胞生长因子以及补体系统,若能找到一种调控因子作用于神经细胞,能够减少ICH的致残率(减少神经细胞的凋亡),将会对ICH病人预后生活质量的改善有着极大的帮助。E1A激活基因阻遏子(CREG)是新近被发现的一个细胞转录调控基因。在人单核细胞、人造血祖细胞和体外培养的人VSMCs、小鼠ES细胞等多种细胞中CREG蛋白可广泛表达并促进细胞成熟分化。为进一步观察CREG对ICH血肿周围神经细胞的影响,本研究以大鼠脑出血模型为研究对象,应用外源性CREG蛋白,治疗ICH造成的脑组织损伤,减少神经细胞凋亡,保护脑组织,促进神经系统功能恢复。方法:1.建立大鼠脑出血模型:大鼠称体质量后用10%水合氯醛(0.035mL/kg)腹腔注射麻醉,固定于脑立体定位仪上,按照大鼠脑立体定位图谱进行定位:采用自体血脑内注入法建立大鼠脑出血模型。2.入选实验的动物随机分为正常组、模型组、CREG治疗组与假手术组,每组分为1、3、5d三个时间点,分为3个亚组,每个亚组n=5,每组15只。正常组和模型组不作任何干预;CREG治疗组按15μg/kg剂量脑内注射,1次/d;假手术组按相同剂量在相同时间点给予生理盐水,1次/d。各组动物饲养环境、条件均相同:分笼普通饲养,自由饮水摄食,室温23℃,湿度50%-60%。用Bederson评分法观察各组大鼠行为学评分变化。3.术后相应时间点处死大鼠,脑组织的取材:免疫组织化学染色CREG和VEGF或Western blot分析VEGF和cleaved caspase-3的表达;RT-PCR测定Bcl-2 mRNA和Bax mRNA的表达;TUNEL染色和Annexin V/PI双染色检测细胞凋亡情况。结果:1.Bederson法评分≥3分的大鼠作为合格脑出血模型入选本实验;2.经过CREG治疗后,免疫组化结果显示VEGF在细胞上的定位和CREG呈正相关,伴随着CREG表达的增多而增多;Western blot结果显示VEGF表达增多,cleaved caspase-3表达减少;RT-PCR测定发现Bcl-2与Bax比率下降;经TUNEL染色和Annexin V/PI检测发现神经细胞凋亡数目减少;而脑出血组和假手术组则各项检查结果均与CREG治疗组各项结果相反。结论:CREG能够减轻大鼠脑出血模型血肿灶周围神经细胞的凋亡,可以减少脑损伤。