肠道组织特异性表达黄曲霉毒素解毒酶转基因小鼠的制备

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黄曲霉毒素(Aflatoxin,AFT)是一类主要由黄曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)真菌产生的次级代谢产物,是许多动物饲料的污染物质,对大多数动物具有很强的毒性。目前,饲料中黄曲霉毒素的去除主要是通过物理、化学、生物降解和酶解法。但这些方法仍存在着许多不足之处。  而利用转基因技术在动物消化道内生产黄曲霉毒素解毒酶(ADTZ)是提高饲料利用率新的研究策略。本研究通过筛选出ADTZ基因片段,并采用鼠的粘蛋白启动子(MUC)成功构建了ADTZ基因肠道特异性表达载体(MUC-ADTZ-LV)。利用原核注射法制备了肠道特异性表达ADTZ转基因小鼠并通过PCR和Southern blotting对基因的整合性进行鉴定。PCR和Southern blotting结果表明成功制备了6只携带肠道特异性表达ADTZ基因转基因小鼠。RT-PCR结果显示仅在小鼠的肠道中检测出了ADTZ基因mRNA特异性表达。肠液中ADTZ的活性为3.72±1.64 U/ml。在饲料中添加黄曲霉毒素并对小鼠进行14d的喂养试验,之后对ADTZ对血清生化指标及小鼠血清和肝脏中的黄曲霉毒素的残留进行了测定。结果发现转基因组血清中总蛋白(TP)和球蛋白(GLP)的含量显著高于阳性对照组,而转基因组血清中的丙氨酸氨基转移酶(GPT)和d冬氨酸氨基转移酶(GOT)的含量显著低于阳性对照组(p<0.05)。转基因组小鼠血清和肝脏中的黄曲霉毒素的残留量显著低于阳性对照组小鼠血清和肝脏中的黄曲霉毒素的残留量。研究结果证明在转基因小鼠的肠道中成功生产了ADTZ,并降低了饲料中黄曲霉毒素对小鼠的毒性影响。  本研究首次制备了肠道转ADTZ基因小鼠,通过对转基因小鼠进行基因水平、转录水平及酶活性的检测,证明可以有效的降低饲料中黄曲霉毒作用。进一步证明将来在转基因猪中生产ADTZ来降低饲料中黄曲霉毒素毒性作用的技术是可行性。
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