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目的:探索人退变髓核细胞复制性老化和应激诱导过早老化的信号通路。 方法: 1、体外培养人正常髓核细胞系(Scien Cell4800)。连续性1∶2传代、培养（理论上可传至P15代），诱导髓核细胞复制性老化。 2、取P1代髓核细胞按1×106个/孔接种于六孔板，按双氧水浓度(50μmol/L、100μmol/L、150μmol/L)和作用时间(30min、1h、2h)分组，氧化应激诱导髓核细胞过早老化。 3、分别对步骤1中的各代细胞及步骤2中的各组细胞行显微镜观察髓核细胞形态、SA-β-Gal染色计数细胞老化率、PI染色流式细胞仪检测G1期细胞比例、Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪定量细胞凋亡率，制备两组髓核细胞老化模型。（注:因目前尚无髓核细胞老化模型的公认标准，本研究中拟定老化率≥80％、G1期细胞≥80％、凋亡率≤10％的造模组为合格的髓核细胞老化模型。） 4、取P1代髓核细胞（老化阴性对照组）、复制性老化模型、应激诱导的过早老化模型3组细胞，采用实时定量RT-PCR检测3组细胞p53、p21、p16、pRb的表达含量。 结果: 1、在诱导髓核细胞复制性老化过程中，随着细胞传代次数的增加，髓核细胞形态逐渐由类圆形、星形、短梭形向长梭形、不规则形等转变，细胞体积逐渐增大、胞质变脆、胞浆空泡化明显。SA-β-Gal染色计数髓核细胞老化率、流式细胞仪检测G1期细胞比例、细胞凋亡率均逐渐增加，传至P12代时三者比例分别为82.1％、84.7％、9.8％，差异与正常P1代髓核细胞相比有统计学意义(P＜0.05)。 2、在氧化应激诱导髓核细胞过早老化过程中，随着双氧水浓度的增加、作用时间的延长，细胞形态逐渐由类圆形向长梭形转变，细胞体积增加、胞浆空泡化明显。SA-β-Gal染色计数髓核细胞老化率、流式细胞仪检测G1期细胞比例、细胞凋亡率均逐渐增大，且100μmol／L双氧水作用P1代髓核细胞2h后三者比例分别为82.3％、83.6％、8.6％，差异与正常P1代髓核细胞相比有统计学意义(P＜0.05)。 3、RT-PCR实验结果显示，在复制性老化模型中，p53、p21、p16、pRb的表达量较对照组均有所增加，但p53、p21、pRb表达量较p16增加明显，差异较对照组有统计学意义(P＜0.05)，p16的表达量较对照组差异无统计学意义(P＞0.05)。在应激诱导的过早老化模型中，p53、p21、p16、pRb的表达量较对照组均有所增加，但p16、pRb表达量较p53、p21增加明显，差异较对照组有统计学意义(P＜0.05)，p53、p21的表达量较对照组差异无统计学意义(P＞0.05)。 结论: 1、通过连续性传代培养人正常髓核细胞系(Scien Cell4800)，成功建立髓核细胞复制性老化模型（P12代髓核细胞）; 2、通过100μmol/L双氧水作用于P1代髓核细胞2h，成功建立应激诱导的髓核细胞过早老化模型; 3、在髓核细胞复制性老化中，老化信号通路以p53-p21-pRb途径为主; 4、在应激诱导的髓核细胞过早老化中，老化信号通路以p16-pRb途径为主。