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目的：克隆小鼠核因子-κB受体活化因子配基(receptoractivatorofnuclearfactorκBligand，RANKL)胞外段cDNA并在大肠杆菌中表达纯化。分析重组蛋白的生物活性。
方法：从小鼠脾组织中分离总RNA，采用RT-PCR方法获得小鼠cDNA，以其为模板，利用PCR方法分两步扩增出RANKL胞外段基因编码序列，克隆入pGEM(R)-TEasy载体，并进行DNA序列分析。然后将目的片段插入融合型原核表达载体pGEX-2T中，重组表达质粒pGEX-2T/RANKL转化入大肠杆菌BL21中诱导表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定可见大约40KD蛋白条带。经优化表达条件后，Westernblotting进一步鉴定该融合蛋白。目的蛋白含GST纯化标签，利用GlutathioneSepharose4B亲和层析纯化。采用体外破骨细胞样细胞诱导分化实验分析重组蛋白生物活性。
结果：获得了小鼠RANKL胞外段cDNA，并成功构建了高效原核表达质粒pGEX-2T/RANKL；Westernblotting印迹结果表明在大肠杆菌中表达了分子量约40KD的目的蛋白；表达产物经纯化，融合蛋白纯度为85％。重组蛋白具有促进破骨细胞样细胞生成的活性。
结论：在大肠杆菌中成功表达了小鼠RANKL胞外段基因，为采用基因工程方法生产RANKL蛋白和进一步的科学研究工作提供了基础。