蛇莓抑制NA的活性成分鉴定及不同NA抑制剂协同作用

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流行性感冒又称流感,是由流感病毒引起的急性呼吸道感染,传染性强,传播速度快。根据世界卫生组织《急性呼吸道感染病报告》(2009年2月更新)统计,全球每年流感大流行期间流感病例约为10亿,重症病例为300万例,并有25万至50万人因此死亡。流感的危害非常严重,而流感病毒则是这一危害的罪魁祸首。  目前疗效最好的抗流感药物是神经氨酸酶抑制剂奥司他韦(oseltamivir)和扎那米韦(zanamivir),但流感病毒惊人的突变能力造成耐药病毒株的出现以及药物本身的副作用,使得扎那米韦和奥司他韦的应用遭到限制。因此,要有效遏制流感,新的抗流感病毒药物的研发和使用迫在眉睫。神经氨酸酶(NA)是存在于A型和B型流感病毒表面的一种糖蛋白,它在子代病毒释放和扩散中有着至关重要的作用,主要表现:①促进新生病毒从感染的细胞中释出;②阻止子代病毒从宿主细胞中释出后的聚集。在所有A型和B型流感病毒的NA都有一致性,即:其活性空腔均位于亚单位表面的口袋中,且催化位点的氨基酸残基均高度保守,因而可作为抗流感病毒药物的靶点。  我国有着丰富的中草药资源,在几千年的发展历史中,中草药在预防抵抗感冒方面功不可没。在对400多种传统中药的提取物进行以甲型流感病毒神经氨酸酶为靶点的系统筛选时,筛选出了五种对流感病毒神经氨酸酶抑制作用显著的中药:蛇莓、路路通、苦楝皮、夏枯草、紫草。选取了蛇莓为研究对象,对其具有神经氨酸酶抑制作用的物质基础进行了研究。  将蛇莓全草粉碎,利用工业酒精冷浸提取得到蛇莓提取物的总的粗浸膏。依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,得到极性不同的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位的提取物。总提取物和各分提取物对流感病毒神经氨酸酶抑制作用的药理活性筛选结果表明,乙酸乙酯部位对神经氨酸酶的抑制作用最强。对该部位进行分离,最终得到五个有活性的单体化合物。并以槲皮素为阳性对照药,对这五种单体化合物进行了对甲型流感病毒神经氨酸酶体外抑制作用的评价。  抗流感药物的疗效在一定范围内与使用剂量成正比,但随着用药剂量的增加,因为用药而发生的毒副作用的风险也会相应的随之增加。作为抗流感药物的神经氨酸酶抑制剂亦不例外。寻找并发现有协同作用的抗流感药物可以使抗流感药物在治疗安全范围内有着更好的疗效:减少流感病毒株出现耐药性的可能性:降低用药剂量,减少因使用抗流感药物而产生的毒性。为此,本次论文选取了木犀草素等十几种不同的神经氨酸酶抑制剂,将其分别与蛇莓中分离鉴定出的对神经氨酸酶有抑制作用的活性成分混合,采用荧光测定法测试其体外对神经氨酸酶的抑制作用。实验结果表明木犀草素、黄芩素分别与委陵菜酸等蛇莓的活性成分混合后的体外抗流感作用增强,有望开发出新的抗流感药物配方。
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