【摘 要】
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红腹角雉(Tragopan temminckii)是国家Ⅱ级重点保护野生动物,主要分布于中国,在印度、缅甸和越南也有少量分布。我们通过建立微卫星文库筛选出8个红腹角雉的特异性微卫星位点
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红腹角雉(Tragopan temminckii)是国家Ⅱ级重点保护野生动物,主要分布于中国,在印度、缅甸和越南也有少量分布。我们通过建立微卫星文库筛选出8个红腹角雉的特异性微卫星位点,所筛选出的红腹角雉特异性微卫星位点多态性较高,用这些微卫星位点,对北京动物园笼养红腹角雉种群进行了亲子鉴定。主要研究结果如下:
1、磁珠富集法筛选出红腹角雉8个特异性微卫星位点。利用生物素标记的微卫星探针与黄腹角雉基因组酶切片段杂交,用有亲和素包被的磁珠捕获这些杂交片段,然后将这些含有微卫星序列的DNA片段连接到pGM-T载体上转入大肠杆菌(Escherichia coli)细胞中,构建出富集微卫星序列的小片段插入文库,然后通过克隆测序得到微卫星的侧翼序列,用引物设计软件OLIGO6.0设计出特异性引物。共得到了8对具有多态性的微卫星位点的引物。检测了秦岭-大巴山地区的一个红腹角雉种群的22只个体,这8个位点的等位基因有6~21个不等,观测杂合度为0.36-0.82,期望杂合度为0.46-0.95。其中有3个位点(TT03,TT05和TT09)极显著偏离哈迪-温伯格平衡(P<0.01)。
2、利用微卫星对北京动物园笼养的12只笼养红腹角雉(其中2只成年雄鸟B和E,3只成年雌鸟A、C和D,7只雏鸟E-L)进行了亲子鉴定。7只雏鸟是人工孵化并混养的。为了提高亲子鉴定的置信度,除我们筛选的8个微卫星位点外,另增加了4个通过跨物种扩增获得的位点,共12个具有多态性的微卫星位点进行鉴定。鉴定结果为有3只雏鸟(G、H和K)为第1笼成鸟的后代(A和B),有3只雏鸟(F、I和J)为第2笼的成鸟D和E的后代,还有1只雏鸟(L)为第2笼的成鸟C和E的后代。用Cervus2.0软件分析结果显示,置信度均达到95%以上,12个位点的联合排除概率为99.886%。
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