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【目的】 1.构建DNM3在大肠癌细胞系SW620和LoVo稳定过表达的细胞模型。 2.研究DNM3过表达对大肠癌细胞系SW620和LoVo增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。 3.探讨DNM3对大肠癌细胞系SW620和LoVo侵袭及迁移的机制。 【方法】 1. DNM3过表达质粒获得。空载体与DNM3真核表达质粒由吉赛生物公司合成。 2. DNM3在 SW620和 LoVo细胞系稳定表达模型构建。使用脂质体LipofectamineTM2000转染细胞，两种细胞系都需要转染空载体（作为后续实验对照组）及DNM3质粒（实验组）。转染后予嘌呤霉素筛选转染后的细胞，并于荧光显微镜下观察绿色荧光检测转染效率及RT-qPCR检测DNM3表达差异。 3. cck8细胞增殖实验、流式细胞凋亡分析、transwell细胞迁移和侵袭实验。采用cck8细胞增殖实验及流式细胞凋亡分析检测DNM3对SW620和LoVo细胞增殖及凋亡的影响；采用transwell实验分析DNM3对SW620和LoVo细胞迁移及侵袭的影响。Westernblot分析DNM3对下游分子MMP2表达的影响。 【结果】 1. DNM3基因的表达。实时荧光定量RT-PCR结果显示SW620细胞DNM3转染组（3.0.338±0.338）DNM3 mRNA的表达水平显著高于未转染组（1.000±0.000）和空载体组（0.839±0.031），均P<0.001。LoVo细胞DNM3转染组（1.939±0.064）DNM3 mRNA的表达水平明显高于未转染组（1.000±0.000）和空载体组（0.945±0.316），均P<0.001。 2. DNM3对SW620和LoVo细胞增殖的影响。细胞培养12h，24h，48h，72h，计算每个时间点的平均OD值，绘制细胞生长曲线图。随着培养时间延长，从培养24小时后开始，SW620和LoVo细胞系中DNM3转染组增殖速度明显慢于未转染组和空载体对照组（均P<0.05）。 3. DNM3对SW620和LoVo细胞凋亡的影响。采用V-PE/7-AAD双染色法，对 DNM3过表达在 SW620和 LoVo细胞凋亡影响分析。在 SW620细胞系中DNM3转染组（9.233±0.451）相比于未转染组（3.367±0.351）及空载体对照组（3.400±0.100）凋亡率存在显著差异（均P<0.001）；在LoVo细胞系中DNM3转染组（26.033±0.751）相比于未转染组（22.667±0.351）及空载体对照组（22.100±0.656）凋亡率也存在显著差异（均P<0.05）。 4. DNM3对SW620和LoVo细胞迁移及侵袭的影响。细胞迁移实验显示，在SW620细胞系中，SW620-DNM3组（92.333±10.970）细胞显著少于 SW620组（207.667±25.423）和SW620-vector组（188.333±17.009）（均P<0.05）；在LoVo细胞系中， LoVo-DNM3组（26.333±4.726）细胞显著少于 LoVo组（211.333±9.073）和LoVo-vector组（119.333±20.033），均P<0.001。细胞侵袭实验结果显示，在SW620细胞系中，SW620-DNM3组（47.333±6.028）细胞显著少于SW620组（120.667±10.066）和SW620-vector组（109.000±11.000），均P<0.001；在LoVo细胞系中，LoVo-DNM3组（15.000±3.606）细胞显著少于LoVo组（102.667±151.177）和LoVo-vector组（52.000±5.568），均P<0.05。 5. DNM3对MMP2蛋白表达的影响。Western blot结果所示，在SW620细胞系中 SW620-DNM3组(0.683±0.012)的 MMP2蛋白的表达水平显著低于SW620组(1.268±0.022)和SW620-vector组(1.160±0.030)，均P<0.001。在LoVo细胞系中LoVo-DNM3组(0.363±0.021)的MMP2蛋白的表达水平显著低于LoVo组(1.234±0.017)和LoVo-vector组(0.873±0.166)，均P<0.001。 【结论】 DNM3在大肠癌细胞系SW620及LoVo中过表达可抑制其增殖、诱导凋亡；并且通过下调MMP2表达抑制其侵袭和迁移能力。