目的:探讨细胞凋亡相关基因在非酒精性脂肪性肝炎(NASH)发生发展中的作用以及己酮可可碱(PTX)对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的大鼠肝细胞抗凋亡的作用。 材料和方法:雄性健康清洁级SD大鼠68只，普通饲料喂养一周后，随机分为8组：8周对照组(6只)，8周模型组(10只)，12周对照组(6只)，12周模型组(10只)，12周治疗组(10只)，16周对照组(6只)，16周模型组(10只)，16周治疗组(10只)。对照组饲以普通饲料，其余各组均以高脂饲料(88％普通饲料、10％猪油、2％胆固醇)喂养。于8周处死8周对照组和8周模型组，并对12周治疗组大鼠予以PTX(16mg/kg—1/d—1)灌胃治疗，于12周处死12周对照组和12周模型组，并对16周治疗组大鼠予以PTX(16mg/kg—1/d—1)灌胃治疗。于实验第16周处死剩余实验动物。腹主动脉采血，检测血浆ALT、AST水平，并观察肝脏的颜色和质地，取肝右叶组织，分别行Bouin液固定、4％的多聚甲醛固定和经液氮冷冻后在—80℃冰箱保存。采用HE和油红O染色观察肝脏的病理变化，采用电镜和TUNEL的实验方法检测肝细胞凋亡的情况，采用免疫组织化学的方法检测肝细胞凋亡基因Bcl—2，Bax，FasL，Caspase—3的表达，应用Western—blotting的方法检测肝脏Caspase—3蛋白的表达，应用RT-PCR检测Bcl—2，Bax，Fas，FasL，Caspase—3 mRNA的转录情况。 结果： 1.肝脏大体的变化：对照组的肝脏红润，质地柔软，边缘锐利，而模型组的肝脏体积增大，质地变脆，边缘园钝，色泽红黄相间，并且随着造模时间的延长还出现了局灶性的黄白色的脂肪沉淀，而治疗组肝脏体积变小，少见脂肪沉淀。 2.大鼠肝脏体重、肝湿重、肝指数的变化：高脂饲料饲养的各组大鼠体毛逐渐发黄、稀疏，性情较温顺，不喜动。各模型组大鼠的体重、肝湿重和肝指数基本上均高于同周数的对照组(P<0.05)，且随着造模时间的延长，模型组的肝指数逐渐增加。16周治疗组大鼠的肝湿重和肝指数低于16周模型组(P<0.05)。 3.大鼠肝功能的变化：随着造模时间的延长，模型组的ALT、AST呈逐渐增高的趋势，与同周数的对照组相比，12周，16周模型组ALT呈显著性增高(P<0.05)，16周模型组AST有显著性增高(P<0.05)，12周，16周治疗组ALT、AST均低于同周数的模型组，与16周模型组相比，16周ALT有显著性降低(P<0.05)。 4.HE染色结果：对照组未见脂肪变的肝细胞，模型组大部分肝细胞脂肪变，以肝小叶周边较多，随着造模时间的延长，各模型组脂肪变范围扩大，并出现炎症和坏死，经过治疗以后在脂肪变和炎症方面有所减轻。 5.油红O染色结果：各组脂肪变的程度与HE染色相一致。 6.大鼠肝脏凋亡的变化：电镜观察，随着造模时间的延长，模型组肝细胞中充满脂滴，线粒体肿大，并且出现肝细胞核皱缩，治疗组结构可见明显改善。TUNEL实验显示，模型组的凋亡的肝细胞数增加，与同周数的对照组相比较，有显著性增加(P<0.05)，尤其以16周模型组增加最为明显，治疗后凋亡有所减轻，与同周数的模型组相比较有显著性降低(P<0.05)。 7.大鼠肝脏Bcl—2，Bax，FasL，Casapse—3免疫组织化学结果：与同周数的对照组相比，各周模型组FasL，Casapse—3的平均吸光度(average absorbance，AA)值均有显著性增加(P<0.05)，Bcl—2与Bax的比值均降低。与同周数的模型组相比，12周，16周PTX治疗组FasL，Casapse—3的AA值均有显著性降低(P<0.05)，Bcl—2与Bax的比值升高。 8.Western Blot方法检测的大鼠肝脏Caspase—3蛋白的表达结果：与免疫组织化学结果一致，与同周数的对照组相比，各模型组Caspase—3蛋白的表达水平增高，8周模型组和12周模型组有显著性增加(P<0.05)，经治疗后，12周，16周PTX治疗组的Caspase—3蛋白降低，但均无统计学意义。 9.大鼠肝脏凋亡基因mRNA的转录水平的变化：RT-PCR检测结果显示，与同周数的对照组相比，各模型组Bcl—2，Bax，Fas，FasL，Caspase—3 mRNA的表达水平均增高，经治疗后，12周，16周PTX治疗组的各凋亡因子的mRNA表达水平均降低。 结论： 1.NASH时，肝脏出现凋亡的肝细胞，并且随着造模时间的延长，凋亡因子Bcl—2/Bax减少，Fas，FasL，Caspase—3的表达逐渐增加，与脂肪变和炎症的变化程度相一致，肝细胞凋亡是NASH发病过程中一个非常重要的病理变化，它也可能是NASH的一个重要的发病机制。 2.经PTX治疗后大鼠肝脏的脂肪变和炎症有所减轻，凋亡因子Bcl—2/Bax增加，Fas，FasL，Caspase—3表达逐渐减少，凋亡程度逐渐减轻，表明PTX具有一定的抗凋亡作用，减轻了NASH的进一步发展。 3.PTX对非酒精性脂肪型肝炎有一定的治疗作用。