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目的： 我们前期研究发现大鼠肝癌前病变肝脏中尾加压素Ⅱ及其受体(UⅡ/UTR)表达上调，且外源给予UⅡ可促进肝脏干细胞卵圆细胞的增殖。为探讨UⅡ/UTR对肝脏干细胞异常增殖的作用机制及其在肝细胞癌发生发展中的作用，本研究观察了UⅡ/UTR在人肝细胞癌中的表达，以及在肝脏干细胞、成熟肝细胞增殖和分化中的作用，探讨UⅡ/UTR参与肝癌发生的机制。 方法： 体内实验:(1)HE染色和AFP免疫荧光区分人肝癌组织及癌旁组织。(2)放射免疫测定检测肝细胞癌患者血浆及癌组织孵育液UⅡ含量。(3)免疫组化、RealtimePCR和Westernblot的方法测定肝细胞癌患者的癌组织及癌旁组织UⅡ/UTR的表达。(4)Westernblot的方法检测PKC、ERK1/2及p38MAPK信号通路的磷酸化水平。 体外实验:(1)RealtimePCR和Westernblot检测肝癌细胞BEL-7402与正常肝细胞QSG-7701UⅡ/UTRmRNA水平及蛋白水平的表达。(2)放射免疫测定检测肝癌细胞BEL-7402、正常肝细胞QSG-7701及卵圆细胞WB-F344细胞培养液UⅡ含量。(3)UⅡ(10-10M-10-6M)孵育肝脏卵圆细胞24h，用CCK8的方法检测细胞增殖，结果提示10-9MUⅡ刺激卵圆细胞时细胞数最多。10-9MUⅡ分别孵育卵圆细胞2h，4h，8h，12h，24h，36h及48h，CCK8检测细胞增殖的结果提示UⅡ刺激卵圆细胞24h时促增殖效应最明显。10-9MUⅡ分别孵育卵圆细胞WB-F3445min、10min、15min、30min、45min和60min，通过Westernblot检测PKC、ERK1/2及p38MAPK蛋白的磷酸化;PKC抑制剂GF109203X、MEK抑制剂PD184352和p38MAPK抑制剂SB203580预处理卵圆细胞30min，而后用10-9MUⅡ刺激24h，BrdU及CCK8法检测卵圆细胞增殖情况，探讨UⅡ促进肝脏干细胞增殖的机制。(4)UⅡ（10-10M-10-6M）孵育肝细胞24h，用CCK8的方法检测细胞增殖，结果提示10-7MUⅡ刺激肝细胞时细胞数最多。10-7MUⅡ分别孵育肝细胞2h，4h，8h，12h，24h，36h及48h，CCK8检测细胞增殖的结果提示UⅡ刺激肝细胞24h时促增殖效应最明显。10-7MUⅡ刺激正常肝细胞QSG-770124h，用Westernblot检测原癌基因c-myc、c-jun和c-fos的蛋白表达变化。 结果： 体内实验： 1.HE染色:人肝癌旁组织呈现肝硬化的表现。镜下可见，肝内纤维组织广泛增生，将原有肝小叶进行重新分割，形成假小叶。假小叶中肝细胞变性坏死和再生肝细胞同时存在，中央静脉偏位或缺如。肝癌组织镜下可见，细胞大小不等，形态不一，细胞核体积增大，数目不一，核浆比例增大，异型增生明显，并可见病理核分裂像及瘤巨细胞。 2.AFP免疫荧光:镜下可见AFP在胞浆表达，呈现绿色荧光。癌旁组织仅有少量AFP表达，而癌组织中细胞荧光显色明显增强，说明AFP表达增高。 3.放射免疫测定结果显示，肝细胞癌患者血浆UⅡ浓度明显高于单纯肝硬化患者，癌组织孵育液UⅡ浓度明显高于癌旁组织孵育液，且具有显著统计学差异(p＜0.05)。 4.肝癌患者癌组织及癌旁组织UⅡ/UTR的表达:肝癌组织UⅡ/UTRmRNA表达量明显高于癌旁组织，且肝癌组织UTR蛋白表达量明显高于癌旁组织，差异有统计学意义(p＜0.05)。 5.Westernblot结果提示人肝癌组织中PKC、ERK1/2和p38MAPK蛋白的磷酸化水平明显高于癌旁组织，差异具有显著统计学意义(p＜0.05)。 体外实验： 1.肝癌细胞BEL-7402及正常肝细胞QSG-7701中均有UⅡ/UTR的表达。BEL-7402细胞UⅡ/UTRmRNA表达量明显高于QSG-7701细胞，且BEL-7402细胞UTR蛋白表达量明显高于QSG-7701细胞，差异有统计学意义(p＜0.05)。 2.放射免疫测定结果显示，肝癌细胞BEL-7402、正常肝细胞QSG-7701及卵圆细胞WB-F344细胞培养液中均有UⅡ表达，提示以上三种细胞均分泌UⅡ。 3.10-9MUⅡ分别刺激卵圆细胞WB-F3445min、10min、15min、30min、45min及60min，Westernblot结果显示PKC、ERK1/2及p38MAPK蛋白磷酸化在刺激10min的时候达到高峰，与对照组相比有统计学意义(p＜0.05)。分别在细胞培养液中加入PKC、MEK和p38MAPK抑制剂孵育卵圆细胞30min，而后加10-9MUⅡ刺激24h，BrdU及CCK8结果提示细胞增殖活性均受到明显抑制(p＜0.05)。以上结果提示UⅡ可能是通过激活PKC、ERK1/2和p38MAPK通路促进卵圆细胞增殖。 4.10-7MUⅡ刺激正常肝细胞QSG-770124h，原癌基因c-myc、c-jun及c-fos蛋白表达明显升高，较对照组有显著统计学差异(p＜0.05)。 结论:UⅡ/UTR在人肝细胞癌中表达明显增高，UⅡ可能以自分泌/旁分泌的形式参与肝细胞癌的发生发展过程。UⅡ/UTR高表达一方面可能通过激活卵圆细胞内的PKC、ERK1/2及p38MAPK通路，使卵圆细胞增殖过度，导致细胞异常分化，从而进一步导致肝癌的发生;另一方面它可能激活正常肝细胞内的原癌基因c-myc、c-jun和c-fos导致肝癌的发生。