【摘 要】
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本课题以E.coli DH5α为质粒pVAX-44的宿主菌,在摇瓶实验中,研究了培养基中几种基质组分对菌体生长及质粒生产的影响,并运用均匀试验设计及相关数学软件优化出培养基的最佳配
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本课题以E.coli DH5α为质粒pVAX-44的宿主菌,在摇瓶实验中,研究了培养基中几种基质组分对菌体生长及质粒生产的影响,并运用均匀试验设计及相关数学软件优化出培养基的最佳配方,在10L发酵罐上进行放大实验,菌体密度OD<,600>为6.0,单位菌体质粒产量为3.88mg/gDCW,分别是未优化的LB培养基的1.36倍和1.24倍.同时在摇瓶实验中,比较了三种温度对菌体生长及质粒生产的影响,发现37℃最适合菌体生长,而42℃最适合质粒生产.在发酵工艺的优化过程中,采用指数流加葡萄糖方式和恒速流加葡萄糖方式相比,菌体密度相差不大,OD<,600>均在19左右,单位菌体质粒产量达到7.8mg/gDCW,高于恒速流加葡萄糖的产量,同时表明长时间的培养对质粒复制不利,并且容易产生大量的菌体蛋白,不利于下游分离纯化处理.通过升温策略实验和补加磷酸盐策略实验确定最终的优化发酵工艺为:采用葡萄糖指数流加方式,在发酵后期将温度由37℃提高到42℃,并维持5个小时,在升温的同时加入磷酸盐溶液,菌体密度OD<,600>为14,单位菌体质粒产量为14.5mg/gDCW,分别提高了2.2倍和3.3倍.
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