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猪肺炎支原体(Mhyo)是引发地方性猪肺炎(EPP)的病原体，同时也是猪呼吸道疾病综合征(DRDC)发生的有力推动者，DRDC通过降低猪生产性能进而危害猪群。 为了减轻和消除Mhyo感染的影响，一些基于以前研究的诊断方法在猪生产中已经得到应用，旨在建立猪群实时健康数据，并且取得了不同程度的成功。感染流行病学的复杂性使得难以完全消除Mhyo，这意味诊断和良好的管理是感染控制和减少疾病暴发的最好方法。本次研究旨在比较现有猪群健康数据的检测方法，提高我们对中国Mhyo传播和感染的认识。因此，进行以下试验步: ⅰ)比较巢式PCR和实时定量PCR对自然条件下猪群Mhyo的检测差异; ⅱ)比较实时定量PCR、ELISA和细菌培养对自然条件下猪群Mhyo的检测差异; ⅲ)比较不同样品尤其是血液和唾液中抗体存在及水平之间的差异。 首先，我们检测鼻拭子样品，比较猪场Mhyo感染率。猪日龄分别为7，14，21，28，30，和35d，采用巢式PCR和实时定量PCR检测早期Mhyo感染程度，确定仔猪最易感染时间。其次，使用实时定量PCR、ELISA和细菌培养对8周龄仔猪进行检测，调查8周龄时感染Mhyo的猪是否会出现血清转阳现象，并且分析基于上述三种方法给出猪群健康数据的可行性。最后，比较鼻拭子、血液和唾液三种样品中抗体水平的差异。样品每周采集一次，共三周，用P97R1蛋白包被96孔板后进行间接ELISA检测抗体水平。 本次研究结果如下: 1、实时定量PCR检测优于巢式PCR 实时定量PCR检测能力更强，所有日龄仔猪的303个样品中检出152个阳性样品(50.2％)。本次研究中，实时定量PCR敏感性体现在试验后1min即可检出10拷贝数的MhyoDNA/μl。巢式PCR检出38个阳性样品(12.5％)，22个样品(7.3％)经两种方法检测均呈阳性，127个样品(41.9％)经两种方法检测均呈阴性。对7日龄和35日龄仔猪的样品进行实时定量PCR和巢式PCR检测，发现Mhyo感染率均最高，7日龄仔猪巢式PCR检测感染率为15.6％，实时定量PCR检测感染率为53.1％;35日龄仔猪巢式PCR检测感染率为18.4％，实时定量PCR检测感染率为56.6％. 2、实时定量PCR检测优于ELISA和细菌培养 实时定量PCR从102个样品中检出81个阳性样品(79.4％)，而细菌培养Mhyo阳性检出率则为51％(52/102)且阳性样品CCU为10-7。细菌培养时培养基颜色变化时间是4-11d。然而，ELISA检测所有样品均为阴性，该结果与实时定量PCR检测结果匹配率为11/102(10.7％)，远低于细菌培养与实时定量PCR的匹配率。 3、ELISA检测唾液样品的结果和检测血液样品的结果具有相关性 ELISA检测唾液时，第四组猪4周龄时的样品较3周龄样品吸光值降低16.7％，其余组猪4周龄时的样品较3周龄样品吸光值均显著升高。ELISA检测血液样品时，第四组猪4周龄样品较3周龄样品吸光值降低17.2％，其余组猪4周龄时的样品较3周龄样品吸光值均显著升高。两种样品检测结果一致。ELISA检测两种样品结果的相关系数分别为:3周龄时，r2=0.8400(p＜0.0005);4周龄时，r2=0.3615(p＜0.0868)(图4-4)。