乌骨鸡是中国特有的品种，主要特点为乌骨、乌皮、乌肉，具有极高的营养价值。研究表明，乌骨鸡的营养价值主要体现在其体内的黑色素。因此，本研究旨在克隆乌骨鸡黑色素主效基因:黑色素皮质激素受体-1(melanocortin1-receptor,MC1 R)，并转染哺乳动物成纤维细胞，以期获得稳定表达的细胞系，为转基因动物的制备打下基础。　　 本试验提取乌骨鸡肌肉RNA，并反转录成cDNA，根据GeneBank发表的原鸡MC1R序列设计引物，使用PCR方法扩增乌骨鸡MC1R基因序列，并连接至pMD-18T载体上，测序后，经限制性内切酶EcoRⅠ和SalⅠ双酶切回收，并与同样经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切的pET-32a相连，转化至Ecoli DH5α中。待酶切鉴定与测序正确后，转化至EcoliBL21(DE3)中，经氨苄青霉素筛选，IPTG诱导表达。经SDS-PAGE检测，表达产物相对分子量约57KD。利用Ni2+能与融合蛋白上的多聚组氨酸结合的特点，进行Ni2+亲和层析纯化，纯化得到的蛋白使用SDS-PAGE检测纯化效果。纯化得到的蛋白与弗氏佐剂乳化后，皮下注射免疫家兔，经四次免疫后，收集其抗血清，制备兔抗鸡MC1R多克隆抗体，经琼脂糖扩散实验检测证明，抗血清效价较高，可做western blot检测用。　　 同时，本试验还将含有EcoRⅠ和SalⅠ双酶切位点的MC1R序列片段与同样经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切的真核表达载体pEGFP-N1相连，构建真核表达载体pEGFP-N1-MC1R。经酶切鉴定与测序正确后，通过电穿孔的方法转染至山羊成纤维细胞中。经20μg/ml G418筛选出阳性克隆。然后通过RT-PCR鉴定重组质粒pEGFP-N1-MC1R已经整合至山羊成纤维细胞基因组中并已开始表达。最后利用实验一制备的兔抗鸡MC1R抗血清进行western blot检测，结果显示:乌骨鸡MC1R基因在山羊成纤维细胞中稳定表达，获得了稳定表达乌骨鸡MC1R基因的稳定表达的细胞系。