目的：通过体外实验，探讨1次加热与2次加热不同时间间隔，对小鼠黑色素瘤的杀伤作用；结合体外实验和在体实验，初步探讨热疗对肿瘤免疫反应的激发作用；研究肿瘤热疗较为理想的热疗剂量及条件，为热疗在肿瘤治疗中的应用提供实验依据。 方法：在恒温水浴中，将黑色素瘤B16细胞进行43℃、48℃和55℃加热。持续时间分别为30分钟、10分钟、5分钟，进行1次及间隔24、48、72小时的2次加热，MTT法检测热对黑色素瘤细胞的杀伤作用。将B16细胞接种于C57BL/6小鼠右侧肋胁部的皮下，建立小鼠皮下肿瘤模型，将64只实验动物随机分为对照组、43℃组、48℃组及55℃组四个大组，每大组又分为四个亚组，每个亚组8只，4个亚组分别在不同的时间点监测肿瘤的生长情况，另4亚组的小鼠于热疗后第10天，眼球取血，采用流式细胞术检测外周血CD4+、CD8+T细胞亚群的变化情况。并取肿瘤组织做病理切片，光镜下观察肿瘤形态学改变。 结果：体外实验结果显示，1次加热组、2次加热组与未加热组比较，以及48℃、55℃2次加热组与1次加热组比较，细胞生存率均明显降低(P＜0.01)；48℃和55℃不同间隔时间2次加热，对细胞生存率的影响差异无显著性意义(P＞0.05)；43℃热疗，肿瘤细胞生长呈现减慢的趋势，与对照组比较差异无显著性意义(P＞0.05)。48℃组、55℃组肿瘤体积与对照组及43℃组相比明显降低(P＜0.01)。43℃组、48℃组和55℃组CD4的表达量均明显低于对照组，CD8的表达量均明显高于对照组，CD4/CD8比值均明显低于对照组(P＜0.01)；48℃组、55℃组CD4的表达量均明显低于43℃组，CD8的表达量均明显高于43℃组，CD4/CD8比值均明显低于43℃组(P＜0.01)。 结论：48℃和55℃持续一定时间的热疗，能不同程度的杀死黑色素瘤细胞；2次热疗对黑色素瘤细胞的杀伤作用优于1次热疗。55℃5分钟、48℃10分钟的单纯热疗，对小鼠黑色素瘤表现出较好的杀伤抑制作用。48℃组和55℃热疗，小鼠的肿瘤生长明显受到抑制，肿瘤体积明显缩小。热疗降低外周血CD4/CD8+T比值，可能是热疗抗肿瘤作用的机制之一。