本课题组前期利用基因敲除技术获得了10余个玉米大斑病菌基因敲除突变体，并明确了其功能。但研究过程中发现，玉米大斑病菌靶基因敲除效率极低，这已成为制约病菌基因功能研究的瓶颈。文献报道，非同源末端连接(NHEJ)是造成靶基因敲除效率较低的主要原因，敲除NHEJ密切相关的基因可以显著提高靶基因敲除的效率。基于此，本研究拟在克隆玉米大斑病菌中与NHEJ密切相关的基因StKU80（DNA末端结合蛋白）的基础上，利用基因敲除技术获得该基因的敲除突变体，并通过分析突变体与野生型菌株表型及致病方面等的差异，明确该基因的功能，最终分析该基因敲除突变体是否可作为靶基因敲除受体。主要研究结果如下:　　(1)克隆得到了玉米大斑病菌StKU80基因，该基因的DNA全长为2439bp，cDNA为2199bp，包含5个外显子和4个内含子;对该基因编码蛋白质分析发现，StKU80p包含KU70p/KU80p蛋白所特有的保守结构域（vWa、Ku78和Ku-PK-bind）。　　(2)获得了StKU80基因敲除突变体。以pBS载体为基本骨架、草胺磷抗性基因（BAR）作为筛选标记，成功构建了StKU80基因敲除载体;利用PEG4000介导原生质体转化方法转化玉米大斑病菌野生型菌株01-23，通过草胺磷抗性筛选及抗性引物PCR、特异引物PCR、RT-PCR、Southern blotting验证，最终获得2株StKU80基因敲除突变体，分别命名为△StKU80-1、△StKU80-2。　　(3)与野生型菌株相比，突变体△StKU80-1、△StKU80-2的菌落颜色形态均发生明显变化，菌丝形态与细胞壁也均出现显著差异。突变体菌落正面呈浅灰色，背面灰褐色，气生菌丝细长、平伏、稀疏，菌落边缘不规则，但菌落生长速率与野生型无明显差异;光镜观察发现，突变体菌丝细胞较野生型变长，但菌丝细胞直径没有明显差异;透射电镜观察发现，突变体菌丝细胞壁变薄，细胞表面的分泌物减少，细胞内线粒体的数量增多;突变体不产生分生孢子。表明StKU80基因参与了病菌菌丝及分生孢子的发育。　　(4)菌丝穿透试验结果发现，野生型菌丝可穿透玻璃纸，而突变体△StKU80-1、△StKU80-2的菌丝均不能穿透玻璃纸;在60h时，突变体△StKU80-1、△StKU80-2菌丝仍不能形成成熟的附着胞，而野生型在24h时即可观察到成熟的附着胞;毒素活性分析发现，突变体的HT-粗毒素活性与野生型的相比没有明显变化。结果表明StKU80参与调控病菌的附着胞发育，但对HT-毒素毒力没有影响。　　(5)本研究发现，突变体△StKU80-1、△StKU80-2对氧胁迫高度敏感，但对紫外辐射反应不敏感。表明StKU80正调控病菌的氧胁迫反应，而不参与对紫外辐射的反应。　　基于上述研究结果，本研究发现玉米大斑病菌StKU80基因参与调控病菌菌丝、分生孢子、附着胞的发育，该基因也参与病菌的氧胁迫反应;但由于该突变体与野生型菌株在生长发育方面具有显著差异，因此不能作为靶基因敲除受体用于基因功能的研究。