论文部分内容阅读
本研究在前期工作中从大鼠子宫腔液中发现一种新的雌激素反应蛋白，ULF—250。研究证实该蛋白只特异地表达于大鼠子宫腔上皮细胞和腺上皮细胞中，并随动情周期的不同表达部位与含量呈现周期性变化。初步研究还显示，抗ULF—250抗体与乳腺癌组织中某种未知抗原产生交叉识别。因此，本研究的目的：在既往研究的基础上进一步鉴定ULF—250的分子属性；并探讨ULF—250与乳腺癌的相关性。
主要实验技术包括：
双向电泳分离、免疫印迹分析、质谱分析及数据库检索等。
路线和方法：
1，ULF—250的分子属性鉴定：去卵巢大鼠补充给予雌二醇造成子宫产生大量宫腔液(ULF)；收集ULF分别进行SDS-PAGE和双向电泳(2—DE)分离；通过Western和2D-Western确认抗ULF—250抗体识别的蛋白成分并与凝胶上的条带或斑点相对应；对目标蛋白分别用MALDI-TOF—MS和HPLC-ESI-MS/MS两种方法进行质谱分析并获得肽质量指纹谱(PMF)；与蛋白数据库比对及文献检索鉴定未知蛋白。
2，ULF—250与乳腺癌的相关性探索：制备人乳腺癌组织提取物，进行SDS-PAGE和双向电泳分离；利用抗ULF—250抗体进行Western鉴定，以获得初步的特异性识别信息以及确认抗原交叉反应性；利用MALDI-TOF—MS对特异识别的蛋白斑点做进一步鉴定分析。
结果：
1，通过2—DE结合MALDI-TOF—MS和HPLC-ESI-MS/MS质谱分析以及查阅文献，确认未知的雌激素反应蛋白ULF—250是ebnerin/DMBT1；
2，用抗ULF—250抗体进行的Western鉴定显示，在乳腺癌组织中有约160kD及55kD等多条蛋白条带被识别；
3，利用2DE—Western抗ULF—250抗体特异识别多个蛋白斑点，择其中3个点进行质谱鉴定，数据库检索提示分别为fibrinogengamma、transferrin、fibrinbeta三种蛋白；
4，上述三种蛋白在乳腺癌的发生中不是关键成分。
结论：
1，经鉴定确认未知的雌激素反应蛋白ULF—250是ebnerin/DMBT1；
2，文献检索提示ebnerin/DMBT1可能在生殖过程中起重要作用。此外，我们的研究显示，该蛋白不仅在子宫上皮细胞表达而且还分泌到子宫腔液中，其功能值得进一步研究；
3，ULF—250与乳腺癌组织可能存在共同抗原，本研究未鉴定出与肿瘤相关的关键抗原，仍可利用抗ULF—250抗体进行广泛深入的鉴定。