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[目的]应用新生大鼠丘脑神经细胞原代培养的方法,探讨谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、γ-氨基丁酸(GABA)三种氨基酸类神经递质,在牛磺酸(Tau)拮抗锰(Mn)诱导丘脑神经细胞损伤中的作用。[方法]取新生24小时以内的SPF级Wistar大鼠丘脑组织进行细胞原代培养,培养至最佳状态后,用于实验。先通过MTT实验筛选Mn和Tau处理浓度,将用于培养的丘脑神经细胞分组为：①空白对照组；②牛磺酸组；③低浓度染锰组；④中浓度染锰组；⑤高浓度染锰组；⑥低锰预防组；⑦中锰预防组；⑧高锰预防组。在各处理组加入处理因素24小时后终止培养,于倒置荧光显微镜下观察并拍照后进行以下检测：BCA法进行蛋白定量用于后续实验参考、高效液相色谱法(HPLC)测定细胞内液及细胞外液中三种氨基酸类神经递质的浓度。[结果]1、通过MTT实验将牛磺酸干预浓度确定为4mmol/L,将染锰的低、中、高浓度分别确定为0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.4mmol/L。2、与空白对照组比较,单纯牛磺酸干预条件下细胞铺展更充分、细胞密度更高；染锰可以导致丘脑神经细胞形态改变、活细胞数量减少,且细胞形态、活细胞数量的改变程度随着染锰浓度的增加而增大；相对于对应的染锰组,牛磺酸预防组细胞形态较完整、活细胞数量较多,但细胞形态改变、活细胞数量减少的程度随着染锰浓度的增加逐渐增大；3、HPLC检测显示：①细胞外：与空白对照组比较,牛磺酸组Glu浓度降低,差异有统计学意义(P<0.01)；与空白对照组比较,染锰各组Glu浓度均明显增高,差异均有统计学意义(P<0.01)；Glu浓度随着染锰浓度的增加逐渐提高,各染锰组之间差异均有统计学意义(P<0.01)；牛磺酸预防各组Glu浓度均低于对应的染锰组,差异均有统计学意义(P<0.01)；各预防组之间,Glu浓度随着染锰浓度的增加逐渐提高,差异均有统计学意义(P<0.01)。与空白对照组比较,牛磺酸组Gln浓度降低,差异有统计学意义(P<0.01)；与空白对照组比较,染锰各组Gln浓度均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01)；Gln浓度随着染锰浓度的增加逐渐降低,各染锰组间差异均有统计学意义(P<0.01)；与对应的染锰组比较,牛磺酸预防各组Gln浓度均较低,差异均有统计学意义(P<0.01)；各预防组之间,Gln浓度随着染锰浓度的增加逐渐降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。与空白对照组比较,牛磺酸组GABA浓度显著提高,差异有统计学意义(P<0.01)与空白对照组比较,染锰各组GABA浓度均有所提高,但只有高浓度染锰组差异有统计学意义(P<0.05)；GABA浓度随着染锰浓度的增加逐渐提高,但各染锰组间差异均无统计学意义(P>0.05)；与对应的染锰组比较,牛磺酸预防各组GABA浓度均明显提高,差异均有统计学意义(P<0.01)；各预防组之间,GABA浓度随着染锰浓度的增加逐渐提高,差异均有统计学意义(P<0.01)。②细胞内：与空白对照组比较,牛磺酸组Glu浓度明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)；与空白对照组比较,染锰各组Glu浓度均明显增高,差异均有统计学意义(P<0.01)；Glu浓度随着染锰浓度的增加而逐渐提高,各染锰组间差异均有统计学意义(P<0.01)；与对应的染锰组比较,牛磺酸预防各组Glu浓度均较低,差异均有统计学意义(P<0.01)；各预防组之间,Glu浓度随着染锰浓度的增加逐渐提高,差异均有统计学意义(P<0.01)。与空白对照组比较,牛磺酸组Gln浓度降低,差异有统计学意义(P<0.01)；与空白对照组比较,染锰各组Gln浓度均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01)；随着染锰浓度的增加,Gln浓度逐渐降低,各染锰组间差异均有统计学意义(P<0.01)；牛磺酸预防各组Gln浓度均高于对应的染锰组,差异均有统计学意义(P<0.01)各预防组之间,Gln浓度随着染锰浓度的增加逐渐降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。与空白对照组比较,牛磺酸组GABA浓度显著提高,差异有统计学意义(P<0.01)；与空白对照组比较,染锰各组GABA浓度有所下降,差异均有统计学意义(P<0.01)；随着染锰浓度的增加,GABA浓度逐渐下降,各染锰组间差异均有统计学意义(P<0.01)；与对应的染锰组比较,牛磺酸预防各组GABA浓度均明显提高,差异均有统计学意义(P<0.01)；各预防组之间,GABA浓度随着染锰浓度的增加逐渐提高,差异均有统计学意义(P<0.01)。③细胞外液与细胞内液3种氨基酸类神经递质的平均浓度：与空白对照组比较,牛磺酸组Glu平均浓度降低,差异有统计学意义(P<0.01)；与空白对照组比较,染锰各组Glu平均浓度均明显增高,差异均有统计学意义(P<0.01)；随着染锰浓度的增加,Glu平均浓度逐渐提高,各染锰组间差异均有统计学意义(P<0.01)；牛磺酸预防各组Glu平均浓度均低于对应的染锰组,差异均有统计学意义(P<0.01)；各预防组之间,Glu平均浓度随着染锰浓度的增加逐渐提高,差异均有统计学意义(P<0.01)。与空白对照组比较,牛磺酸组Gln平均浓度降低,差异有统计学意义(P<0.01)；与空白对照组比较,染锰各组Gln平均浓度均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01)；随着染锰浓度的增加,Gln平均浓度逐渐降低,各染锰组间差异均有统计学意义(P<0.01)；与对应的染锰组比较,牛磺酸预防各组Gln平均浓度均较低,差异均有统计学意义(P<0.01)：各预防组之间,Gln平均浓度随着染锰浓度的增加逐渐降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。与空白对照组比较,牛磺酸组GABA平均浓度显著提高,差异有统计学意义(P<0.01)；与空白对照组比较,染锰各组GABA平均浓度有所提高,但差异均无统计学意义(P>0.05)；随着染锰浓度的增加,GABA平均浓度逐渐提高,但各染锰组间差异均无统计学意义(P>0.05)；与对应的染锰组比较,牛磺酸预防各组GABA平均浓度均明显提高,差异均有统计学意义(P<0.01)；各预防组之间,GABA平均浓度随着染锰浓度的增加逐渐提高,差异均有统计学意义(P<0.01)。④Glu平均浓度/GABA平均浓度：与空白对照组比较,牛磺酸组(Glu平均浓度/GABA平均浓度)的值降低,差异有统计学意义(P<0.01)；与空白对照组比较,染锰各组(Glu平均浓度/GABA平均浓度)的值均明显增高,差异均有统计学意义(P值均<0.01)；与低浓度染锰组比较,中、高浓度染锰组(Glu平均浓度/GABA平均浓度)的值显著提高,差异均有统计学意义(P<0.01)；中、高浓度染锰组之间,(Glu平均浓度/GABA平均浓度)的值差异无统计学意义(P>0.05)；牛磺酸预防各组(Glu平均浓度/GABA平均浓度)值均低于对应的染锰组,差异均有统计学意义(P<0.01)；各预防组之间,(Glu平均浓度/GABA平均浓度)的值随着染锰浓度的增加逐渐提高,但差异均无统计学意义(P>0.05)。[结论]锰可致体外原代培养的丘脑神经细胞损伤,牛磺酸可在一定程度上拮抗此毒作用；Glu可能在锰致体外原代培养的丘脑神经细胞损伤机制中起到重要作用,GABA可能在牛磺酸拮抗锰致体外原代培养的丘脑神经细胞损伤中机制起到重要作用。