为了解决蛋白质组学研究中存在的分离与检测困难,本文开展了一些研究并取得进展,研究主要集中在以下几个方面.发展了适合电喷雾质谱(ESI-MS)检测的毛细管电泳(CE)动态涂层方法,以提高蛋白酶解肽的分离与鉴定.利用羟丙基纤维素溶液动态涂层的技术,修饰毛细管管壁,改善CE分离效率.在不影响质谱检测的条件下,动态涂层毛细管电泳与质谱检测联用有效地提高了对蛋白质的鉴定能力,应用该技术对复杂蛋白质样品的酶解产物进行了分析鉴定,取得了较为满意的结果.胰蛋白酶固定石英毛细管酶解-CE或基质辅助激光解吸—飞行时间质谱(MALDI-TOF/MS)的研究:肽谱分析是进行蛋白质鉴定和获得蛋白质结构信息的有力工具.本文制作了胰蛋白酶固定的石英毛细管用于快速的的蛋白酶解和肽谱分析.建立了一种基于溶胶—凝胶包埋聚氯化丙基铵(PDDA)和静电吸附原理的石英毛细管表面固定化酶的方法,该固定化酶方法具有固定条件温和、酶表观活性高,可反复再生等优点.低丰度蛋白的分析与鉴定是蛋白质组学研究的重点和难点,其中低丰度样品的富集提高检测水平的关键步骤.为此,我们首次开发了以纳米沸石为吸附载体的样品富集-MALDI-TOF/MS分析方法.利用纳米沸石比表面积大,表面硅羟基丰富,具有良好的离子交换性能和丰富可调的表面性质的特点,对极性化合物如多肽、蛋白质进行浓缩和测定.样品被沸石吸附后无需洗脱,直接与有机基质混合进行MALDI/MS分析.我们仔细研究了纳米沸石的吸附机制、不同沸石材料对吸附性能和对MALDI效率的影响,从中筛选了两种富集效率高、对MALDI过程影响小的纳米沸石材料S-1和β-60.此外,还发展了一种适合商品自动切胶—酶解仪使用的聚丙烯酰胺胶的制备及其应用的方法.通过硅烷化反应在制胶玻板表面引入碳碳双键,使聚丙烯酰胺凝胶共价键合在制胶玻板的表面.利用玻板的支撑作用实现对凝胶的自动切胶和酶解操作.