【摘 要】
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以美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ARCC VR-2332株基因组序列为参照,利用Oligo4.0软件设计21对特异引物,用于分段扩增PRRSV BJ-4株基因组cDNA.采用反转录聚合酶链式反应
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以美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ARCC VR-2332株基因组序列为参照,利用Oligo4.0软件设计21对特异引物,用于分段扩增PRRSV BJ-4株基因组cDNA.采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增出21条与预期大小相同的基因片段,并将其分别克隆于pGEM-T-easy质粒载体上.对经特异性酶切鉴定确定证为阳性的重组质粒进行测序,并按顺序将这些序列进行拼接,从而得到PRRSV BJ-4株全基因组cDNA序列.序列测定结果表明,PRRSV BJ-4株基因组全长15504bp,含有八个开放阅读框,5端有190nt先导序列,3端有256nt的UTR其中包括105nt Poly(A)尾.BJ-4与欧美毒株VR-2332,Nebreska,LV全基因组序列比较显示,BJ-4株与Nebreska关系密切,核苷酸及推导氨基酸同源率分别为98.39﹪和96.50-99.43﹪,BJ-4株与VR-2332株更为相近,只发生了少数碱基的插入(20nt),缺失(3nt)和置换(55nt),核酸及推导氨基酸同源率高达99.50﹪及97.50-100﹪.而其与LV株相差较远,核苷酸及推导氨基酸同源率仅为62.5﹪和50.6-78.9﹪.同国内已确定为美洲型的PRRSV CH-la的结构蛋白基因ORF<,2-7>进行比较分析发现,BJ-4株与CH-la株核苷酸及推导氨基酸同源率也很高分别为93.32﹪和89.00-97.70﹪.对PRRSV BJ-4株全基因组序列测定表明,BJ-4株在基因水平上与VR-2332株相近,而与LV株相差较远.分析美洲型毒株的结构蛋白基因发现,同和美洲型的VR-2332,Nebreska,CH-la和BJ-4株的ORF<,6>和ORF<,7>相对保守,而ORF<,5>变异较大.
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