PTP1B对子宫内膜癌细胞株凋亡的影响

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kwok916
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目的:探讨蛋白质酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)对子宫内膜癌细胞凋亡的影响。探索子宫内膜癌发病机制,为子宫内膜癌的诊断和治疗提供理论依据和思路。  方法:首先体外培养人子宫内膜癌细胞株(Ishikawa),将其分为4组,即空白对照组(Ctrl组),凋亡组(SDS组),介导PTP1B基因的腺病毒组(SDS+PTP1B组)及空病毒组(SDS+Lacz组),使PTP1B在Ishikawa中过表达。然后采用蛋白免疫印迹杂交技术检测凋亡相关蛋白Bc1-2的表达情况;再采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)微量酶反应比色法进行细胞生存力的检测,吖淀橙/溴化乙啶(AO/EB)双染色观察外源性PTP1B基因介导的蛋白表达对Ishikawa细胞形态学的影响,通过以上方法来检测PTP1B对子宫内膜癌细胞凋亡的影响。  结果:1.蛋白免疫印迹杂交技术验证了介导PTPIB基因的子宫内膜癌细胞高表达PTP1B蛋白,而内源性子宫内膜癌细胞则未见PTP1B蛋白的表达。各组子宫内膜癌细胞均有Bc1-2蛋白的表达,其值分别为Ctrl组(91.24±0.16)%,SDS组(41.94±0.20)%,SDS+PTP1B组(78.53±0.12)%,SDS+Lacz组(48.1±0.09)%。与SDS组相比较,SDS+PTP1B组的Bc12蛋白含量相对增加37.04%。2.若以Ctrl组为标准,其细胞存活率为100.00%,那么SDS组为(49.27±0.21)%,SDS+Lacz组为(55.30±0.19)%,SDS+PTP1B组为(79.93±0.24)%,与SDS组相比较SDS+PTP1B组提高了30.66%。3.通过荧光显微镜观察,Ctrl组大部分细胞发出绿的荧光,表现为正常细胞的染色特征;SDS组及SDS+Lacz组大部分细胞呈现橙红色的荧光,并且出现细胞体积大小不等形态不规则现象,出现被染成橙红色的凋亡细胞;SDS+PTP1B组仅少量细胞内出现橙红色的荧光,表明存在较少量的凋亡细胞。  结论:1.各组子宫内膜癌细胞均可以检测到Bc1-2蛋白的表达,经PTP1B基因介导的子宫内膜癌细胞Bc1-2蛋白表达量较凋亡组增加,提示PTP1B对子宫内膜癌凋亡细胞起到抑制作用。2.与凋亡组比较,经PTP1B基因介导的子宫内膜癌细胞存活率有所提高,提示PTP1B可促使子宫内膜癌细胞的存活。3.经PTP1B基因介导后细胞内出现橙红色荧光的子宫内膜癌细胞数量减少,表明凋亡的子宫内膜癌细胞减少。提示PTP1B对子宫内膜癌细胞凋亡起到抑制作用。
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