ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat 1在小鼠胚胎成纤维细胞内的优化表达

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ω-3多不饱和脂肪酸(PUFAs)在哺乳动物细胞功能和细胞分化中起重要作用,但由于膳食原因,人体摄入ω-6PUFAs/ω-3PUFAs比例过高,脂类代谢严重失衡。鉴于ω-3PUFAs获取困难而且催化ω-6PUFAs向ω-3PUFAs转化的ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶不能由人体自身产生,本研究从秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)中取得了ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶基因(fat1基因)编码序列cDNA,并按照哺乳动物常用密码子表,对其编码序列中稀有密码子进行优化。构建了真核表达载体pEGFPC1-fat1(野生型)与pEGFPC1-Ofat1(突变后),再将两个载体转染入小鼠胚胎成纤维细胞;荧光显微镜观察与RT-PCR方法检测到fat1与Ofat基因在细胞内均呈高效表达,气相色谱分析显示fat1与Ofat基因表达前后细胞中ω-6PUFAs/ω-3PUFAs比例均明显降低;细胞抑制率实验显示转染pEGFPC1-fat1组和pEGFPC1-Ofat1组的细胞比对照组转染pEGFPC1的细胞MTT吸光值增高(P<0.05);双染法流式细胞仪分析转染转染pEGFPC1-fat1组和pEGFPC1-Ofat1组的细胞比转染pEGFPC1的对照组细胞凋亡程度减低,表明fat1与Ofat1基因即使在高浓度ω-6PUFAs的细胞毒作用下情况,也能够发挥抑制小鼠胚胎成纤维细胞凋亡,促进哺乳动物细胞生长增殖的细胞保护功能,为进一步在动物体内实验研究该基因生理生化作用打下了基础。
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