小叶黄杨抗心肌细胞氧化损伤有效组分与质量控制研究

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目的: 明确小叶黄杨的抗心肌氧化损伤有效组分及其药用物质基础,建立药材的质量控制方法。  方法: 将小叶黄杨药材粉末用75%乙醇提取得醇提物,剩余药渣再用水提醇沉和 Sevage除蛋白得水提物;乙醇粗提物用pH=3酸水溶散,先乙酸乙酯(A)萃取,后将水层液碱化至pH=9,再用氯仿(B)和正丁醇(C)依次萃取,分别得到组分A、B和C以及水组分D;药渣水提物再用水提醇沉法和Sevag试剂除蛋白得到粗多糖组分E;对获得的5个组分进行抗过氧化氢诱导的H9c2心肌细胞氧化损伤试验,筛选出小叶黄杨的抗心肌细胞氧化损伤有效组分;利用各种现代和经典色谱分离手段对小叶黄杨各个制备组分进行系统的分离、纯化,根据单体化合物的相关理化性质和波谱特征数据对其结构解析与鉴定,进一步的明确小叶黄杨物质基础以及有效组分的化学成分。以有效组分及其主要成分的含量为对象,进行药材的质量控制研究,并采用聚类分析法对含量测定和指纹图谱研究结果进行统计分析。  结果: 实验证实氯仿组分(B)为小叶黄杨的抗心肌细胞氧化损伤有效组分,其具有明显的保护心肌细胞活性。分别从乙酸乙酯组分、氯仿组分、正丁醇组分共分离得到了19个化合物,鉴定了其中16个化合物:4′,5-二羟基-3,3′,6,7-四甲氧基黄酮(1),4′,5-二羟基-3,6,7-三甲氧基黄酮(2),3′,4′,5-三羟基-3,6,7-三甲氧基黄酮(3),松脂素(4),3′-O-去甲基表松脂素(5),阿魏酸甲酯(6),对羟基肉桂酸甲酯(7),黄花菜木脂素A(8),紫丁香苷(9),异落叶松脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷(10),(+)-buxaquamarine(11),(-)-16α-hydro xybuxaminone(12),buxaminone(13),cyclobuxoviridine(14),moenjodaramine(15),3,6,7-三甲基-5,3′-二羟基黄酮醇-4′-(β-D-呋喃木糖-(1′′′→6′′)-β-D-吡喃葡萄糖苷(小叶黄杨苷)(16);对分离得到单体化合物进行对照品筛选研究,获得了纯度和含量均较高的对照品环黄杨酮碱(cyclobuxoviridine),并以这个对照品化合物为指标,对16批小叶黄杨药材进行了指纹图谱和含量测定。根据测定结果,建议小叶黄杨药材内环黄杨酮碱含量不得少于0.012%。  结论: 在已鉴定的化合物中,化合物3,6,7-三甲基-5,3′-二羟基黄酮醇-4′-(β-D-呋喃木糖-(1′′′→6′′)-β-D-吡喃葡萄糖苷(16)为新化合物,将其命名为小叶黄杨苷;其余4′,5-二羟基-3,3′,6,7-四甲氧基黄酮(1),松脂素(4),3′-O-去甲基表松脂素(5),阿魏酸甲酯(6),对羟基肉桂酸甲酯(7),紫丁香苷(8),异落叶松脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷(10),(+)-buxaquamarine(11),(-)-16α-hydroxybuxaminone(12),Buxaminone(13),cyclobuxoviridine(14),moenjodara mine(15),共13个化合物均为该植物中首次报道的化合物。课题基本阐明了小叶黄杨的药用有效组分和化学物质基础;明确了小叶黄杨在相关制剂中的作用;建立了准确度好、灵敏度高、稳定可靠的小叶黄杨药材含量测定和指纹图谱研究方法,并规定了药材中环黄杨酮碱的含量限度,在原有药材质量标准中加入了薄层色谱鉴别和含量测定方法,提升了药材的质量控制标准。
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