大鼠严重烧伤后结肠平滑肌及其小动脉血管平滑肌细胞表型转化的实验研究

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多器官功能障碍综合征 (Multiple Organ Dysfunction Syndrome,MODS) 是严重烧伤主要死亡原因之一,现已证实缺血缺氧是导致严重烧伤多脏器损害的主要始动因素之一,肠道是对缺血、缺氧损害最为敏感的器官之一,缺血缺氧导致细胞氧利用及能量代谢障碍,并可进一步导致失控性炎症反应,最后导致细胞功能的广泛损害,使之产生凋亡或死亡。且严重烧伤后,由于肠粘膜屏障损害、免疫功能抑制和肠道菌群紊乱,肠道中的细菌和内毒素可通过受损的肠粘膜屏障侵入到体循环和其它脏器,形成肠源性感染。进一步发展可成为全身炎症反应综合征(SystemicInflammatory Response Syndrome,SIRS)乃至MODS的始动因素。目前,烧伤后脏器早期损害的防治研究主要集中于对减轻烧伤早期肠粘膜损害,保护肠粘膜屏障功能的探讨,其关键问题是尽快恢复受损的组织细胞的功能,对严重烧伤及机体应激反应过程中肠道本身的结构和功能改变的研究也逐渐重视起来。 机体在正常情况下,循环血流的30%流经胃肠道。当机体受到严重烧伤甚至发生休克时,全身血液重新分配,胃肠道血流明显减少,最早发生缺血缺氧,肠绒毛发生缺血性损害,上皮细胞水肿坏死,肠通透性增加,发生细菌毒素移位,产生肠源性感染。严重烧伤同时导致胃肠运动障碍,早期胃排空及肠道推进功能明显下降,胃肠道及其血管平滑肌是胃肠动力的基础和源泉,胃肠平滑肌节律性的收缩、舒张维持胃肠道消化吸收营养物质、排泄废物等正常生理功能。血管平滑肌细胞与血管的结构及功能变化密切相关,关于严重烧伤后胃肠道及其血管平滑肌的变化规律,目前尚不明确,本课题拟通过烧伤大鼠模型,研究严重烧伤后胃肠运动功能的改变和肠道平滑肌细胞及其粘膜下小动脉血管平滑肌细胞表型转化的变化规律。旨在探讨肠道平滑肌及其粘膜下小动脉血管平滑肌肌动蛋白在烧伤后胃肠运动变化中的作用,为进一步研究改善烧伤后胃肠运动功能,防治肠源性感染提供一个新的思路。 一、材料与方法: 1.采用大鼠Ⅲ°30%TBSA烧伤模型,检测伤后1、2、6、12、24、48、72h不同时相点炭末胶液灌胃后的炭末推进率,了解烧伤后胃肠运动功能的变化情况。 2.采用大鼠Ⅲ°30%TBSA烧伤模型,取材伤后1、2、6、12、24、48、72h不同时相点结肠标本,采用免疫组化方法检测结肠平滑肌肌动蛋白的表达。 3.采用大鼠Ⅲ°30%TBSA烧伤模型,取材伤后1、2、6、12、24、48、72h不同时相点结肠标本,采用免疫组化方法检测结肠粘膜下小动脉血管平滑肌肌动蛋白的表达。 二、主要结果: 1.大鼠Ⅲ°30%TBSA烧伤模型,伤后1、2、6、12、24、48、72h不同时相点,炭末胶液灌胃后的炭末推进率分别为72.81%、54.11%、38.52%、47.32%、40.01%、45.86%、42.46%,正常对照组炭末推进率74.20%。 2.大鼠Ⅲ°30%TBSA烧伤模型,伤后1、2、6、12、24、48、72h不同时相点,取材大鼠近回盲部结肠组织,包埋切片,采用SABC法免疫组化技术检测肠壁组织平滑肌肌动蛋白的表达。伤后2h粘膜下肌层平滑肌肌动蛋白的表达下降,伤后6h表达最低(PU值5.335),伤后12h-24h平滑肌肌动蛋白的表达上升,伤后48h平滑肌肌动蛋白的表达再次下降,伤后72h平滑肌肌动蛋白的表达再次上升。而肠壁组织平滑肌肌动蛋白的表达变化略小,同样呈先降低后升高,再降低又升高,表达最低在伤后48h(PU值2.755)。 3.大鼠Ⅲ°30%TBSA烧伤模型,伤后1、2、6、12、24、48、72h不同时相点,取材大鼠近回盲部结肠组织,包埋切片,采用SABC法免疫组化技术检测粘膜下小动脉血管平滑肌肌动蛋白的表达。其表达在伤后2h开始升高,伤后12h最高(PU值9.84),并持续到伤后24h,伤后48h血管平滑肌肌动蛋白的表达降至(PU值4.005)最低伴随血管平滑肌内膜下增生,伤后72h血管平滑肌肌动蛋白的表达再次升高。 三、结论: 1.大鼠烧伤后炭末胶液灌胃后的炭末推进率较正常对照组炭末推进率明显降低,伤后6小时起尤为明显,伤后72小时仍未见恢复迹象,表明烧伤后胃肠运动功能受到明显抑制。 2.大鼠烧伤后肠壁及粘膜下肌层平滑肌肌动蛋白的表达先降后升再降又升,平滑肌由收缩表型转化为合成表型,并相互转化,使平滑肌组织正常的收缩功能降低恢复又降低再恢复。 3.大鼠烧伤后24小时内,血管平滑肌肌动蛋白的表达先升高,血管平滑肌收缩,血管管腔变窄,伤后48小时血管平滑肌肌动蛋白的表达降至最低,然后再次升高。 根据上述结果,作出以下结论或推论:1)大鼠严重烧伤后炭末推进率降低,胃肠蠕动功能受到明显抑制,这种功能减弱可能是导致肠道菌群与毒素失调、移位的重要原因;2)伤后蠕动、排空功能受损可能是由于肠道黏膜下层平滑肌发生表型转化由收缩表型转化为合成表型造成,3)粘膜下血管平滑肌发生表型转化导致血管重构、管腔变窄、管壁弹性下降,血管阻力增大,肠道供血减少。
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