沙门氏菌烈性噬菌体生物学特性研究及全基因组序列分析

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沙门氏菌是常见的人畜共患病原菌,在畜牧业和公共卫生领域造成重大影响,目前沙门氏菌耐药性越来越严重,治疗难度越来越大。本研究从临床分离沙门氏菌及沙门氏菌噬菌体,对分离到的沙门氏菌噬菌体进行生物学特性的研究,并对其中一株进行全基因组测序和基因注释。  本研究主要内容包括:⑴使用沙门氏菌的invA基因的PCR方法对分离到的菌株进行检测,从病鸡和病鸭中总共分离到25株沙门氏菌。对分离到25株沙门氏菌及实验室保存的7株沙门氏菌检测对26种抗生素的敏感情况,32株沙门氏菌均存在不同程度的耐药性,且大多数菌株都存在多重耐药。⑵从商品肉鸭厂采集鸭粪和垫料,采用双层平板法分离到2株沙门氏菌噬菌体,两株噬菌体在双层平板上形成的噬菌斑均匀透亮,直径约2mm,通过效价和裂解谱的测定,2株噬菌体效价均能达到109PFU/mL,除宿主菌外均能裂解多株其它沙门氏菌,均为宽裂解谱烈性噬菌体,电镜观察2株噬菌体均为长尾噬菌体,分别命名为BS3和BS4。⑶对分离到2株沙门氏菌噬菌体进行最佳MOI、一步生长曲线、温度、pH、紫外线稳定性等生物学特性的研究,噬菌体BS3和BS4的最佳MOI分别为0.001和0.01;两株噬菌体的在40℃下作用1h后基本能保持原效价;噬菌体BS3在pH4~12范围内基本能保持原效价,噬菌体BS4在pH5~11范围内基本能保持原效价;紫外线稳定性方面,噬菌体BS3和BS4在紫外灯下连续照射1h后,效价分别下降3个和4个数量级。⑷对沙门氏菌噬菌体BS3的全基因组序列进行测序,测得基因组全长为43696bp,为双链DNA,对其全基因组序列进行了注释,噬菌体BS3共注释得到64个开放阅读框,对预测到的开放阅读框进行分析,大部分为假设蛋白,有注释结果的29个蛋白中有裂解相关蛋白、结构蛋白、核酸相关蛋白等,分析了主要蛋白的一级、二级、三级结构,主要的二级结构为α螺旋、延伸链、β折叠、无规卷曲,对噬菌体BS3的全蛋白进行SDS-PAGE检测,结果显示总共跑出5条带,大小从39KD到90KD不等,蛋白质谱分析结果显示,跑出的五条带包括宿主蛋白、尾刺蛋白、门户蛋白、尾部蛋白、衣壳蛋白。
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