【摘 要】
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[目的]研究骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs）创缘注射对小鼠乳腺癌全层皮肤切除创面愈合的影响,为临床上治疗乳腺癌癌性创面提供理论依据。[方法]采用提取全骨髓的方法进行BM-MSCs的分离和培养,从功能学和形态学上进行BM-MSCs的鉴定。采用4T1细胞株移植法建立小鼠乳腺癌模型。在BALB/c小鼠肩背部建立正常皮肤创面模型及乳腺
【基金项目】
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研究生创新基金（2020S245）；
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[目的]研究骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs）创缘注射对小鼠乳腺癌全层皮肤切除创面愈合的影响,为临床上治疗乳腺癌癌性创面提供理论依据。[方法]采用提取全骨髓的方法进行BM-MSCs的分离和培养,从功能学和形态学上进行BM-MSCs的鉴定。采用4T1细胞株移植法建立小鼠乳腺癌模型。在BALB/c小鼠肩背部建立正常皮肤创面模型及乳腺癌皮肤创面模型,随机分为BM-MSCs处理乳腺癌创面的实验组A组、生理盐水处理乳腺癌创面的对照组B组,生理盐水处理正常皮肤创面的空白组C组。在术后第7、14、21d时分别观察每组小鼠创面的愈合情况,并拍照和记录每组小鼠创面的愈合率;采用HE染色法检测每组小鼠皮肤创面随时间改变的病理学改变,免疫组化法检测每组小鼠皮肤创面随时间变化而改变的的VEGF、TGF-β1和Smad7的表达。[结果]1、全骨髓法可快速分离出大量有生物学活性的BM-MSCs,细胞形态观察及诱导成脂、成骨可提示所培养的细胞为BM-MSCs。接种4T1细胞的小鼠在肩背部成瘤,病理学检测提示为浸润性乳腺癌,小鼠乳腺癌表面的皮肤创面有乳腺癌细胞浸润,说明乳腺癌癌性创面造模成功。2、术后7d时,C组小鼠皮肤创面愈合明显快于B组（P<0.05）,而A组与B组小鼠皮肤创面愈合速度相当（P>0.05）;14d时,B组小鼠皮肤创面愈合速度明显慢于A组及C组（P<0.05）,而A组与C组小鼠的皮肤创面愈合速度相当（P>0.05）;21d时,B组小鼠的皮肤创面愈合速度与A组、C组小鼠皮肤创面的愈合速度相当（P>0.05）,而A组小鼠皮肤创面愈合速度明显快于C组小鼠皮肤创面的愈合速度（P<0.05）。3、免疫组化显示实验组、对照组及空白组创面VEGF、TGF-β1在7、14d表达逐渐增多,21d逐渐减少,且在个时间点中VEGF、TGF-β1表达在实验组最高,对照组次之,空白组最低;实验组、对照组及空白组中的Smad7在7、14d表达逐渐降低,21d表达逐渐增多,且各个时间点中Smad7在实验组中表达最低;对照组次之,空白组最高。在7d和14d时,VEGF在A组中的表达较B组高（p<0.05）;在C组中的表达含量与A组、B组中的表达含量相当（p>0.05）;21d时,在A组中的表达含量比在B组、C组两组中的表达含量高（p<0.05）;而在B组中的表达含量与C组中的表达含量相当（p>0.05）。在术后7d,TGF-β1和Smad7在分别在A组、B组和C组中的表达含量相当（p>0.05）;14d时,TGF-β1在A组中的表达含量最高,B组次之、C组中的含量最低（p<0.05）;而Smad7在A组中的表达含量较C组高（p<0.05）,在B组中的表达含量和A组、C组中的表达含量相当（p>0.05）;21d时,TGF-β1在A组中的含量较C组中的含量高（p<0.05）,在B组中的表达含量与A组、C组中的含量相当（p>0.05）;而Smad7在A组、B组、C组中的表达含量相当。[结论]1、通过全骨髓法可快速分离出大量的BM-MSCs细胞,通过培养传代可纯化BM-MSCs细胞,并通过成脂、成骨诱导培养鉴定骨髓间充质干细胞。2、接种的4T1细胞在小鼠体内能存活,并在小鼠的肩背部成瘤,小鼠乳腺癌创面皮肤病理学检测到乳腺癌细胞浸润,说明小鼠乳腺癌创面造模成功。3、BM-MSCs对小鼠乳腺癌创面愈合有促进作用,其对创面愈合的作用可能是通过依赖增强皮肤创面中的VEGF及调节的TGF-β1/Smad7信号通路来促进乳腺癌创面血管的生成和上皮细胞的增殖从而实现皮肤创面的修复愈合。
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