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目的:
探讨人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下Toll like receptor 4(TLR4)mRNA表达及中药单体大黄素(emodin)、丹皮酚(paeonol)对其表达的干预,为预防内毒素致内皮细胞损伤提供实验依据。
方法:
分别采用不同剂量大黄素的(2μg/ml,5μg/ml,10μg/ml)和丹皮酚(5μg/ml,10μg/ml,20μg/ml)预保护HUVECs 24小时,继之用LPS(1μg/ml)刺激2,4,6小时,通过逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测TLR4 mRNA表达水平。
结果:
1.HUVECs存在TLR4 mRNA的基础表达。LPS刺激2、4、6小时后可提高TLR4mRNA的表达,但未表现出时间依赖性。LPS作用4小时后,HUVECs表达TLR4mRNA上升最显著。
2.2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml的大黄素可以降低LPS作用2、4、6小时诱导的TLR4mRNA表达(p<0.05)。且在LPS作用2、4小时,随着大黄素浓度的增加,TLR4mRNA的表达有下降趋势(p>0.05)。与2μg/ml大黄素相比,浓度为5μg/ml的大黄素在LPS刺激2、4小时后,能降低HUVECs对TLR4 mRNA的表达(p<0.05)。
3.5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml的丹皮酚可以降低LPS作用2、4、6小时诱导的TLR4mRNA表达(p<0.05)。随着丹皮酚浓度的增加,TLR4 mRNA的表达并不具有浓度依赖性的降低。与5μg/ml丹皮酚相比,浓度为10μg/ml的丹皮酚在LPS刺激2、6小时后,能降低HUVECs对TLR4 mRNA的表达(p<0.05)。
结论:
1.HUVECs在LPS刺激下,TLR4 mRNA表达水平增加。
2.大黄素、丹皮酚可抑制HUVECs在LPS刺激时TLR4 mRNA的表达,对内毒素致内皮细胞损伤具有预防作用。