论文部分内容阅读
以往研究通过mRNA差异显示技术和差异蛋白质组学技术发现转录因子Vsxl在金鱼单倍体胚胎中不表达,而在二倍体中表达,Vsxl基因是调节前脑和眼睛发育的重要基因,分析Vsxl基因是与金鱼眼睛空间模式形成相关的调控基因和二倍体依赖型机制的侯选目标基因。为进一步了解Vsxl在金鱼胚胎发育中和二倍体依赖型基因表达调控机制中的作用,采用反义寡核苷酸技术抑制Vsxl的表达,再用比较蛋白质组学方法来研究Vsxl沉默引起的蛋白质组的变化,从而探究Vsxl在金鱼胚胎发育过程中的功能及其调控方式。
本文以注射了反义寡核苷酸(ATG-MO)的胚胎为实验组,以注射SCON-MO的胚胎为对照组,观察注射后实验组和对照组的发育情况,发现在原肠早期,实验组有67.6%不能继续发育,而对照组的胚胎只有10.6%左右因机械损伤、胰酶消化等原因而死亡,表明ATG-MO的作用导致Vsxl表达受阻,致使胚胎在原肠期发育停滞。
对实验组和对照组的胚胎全蛋白质采用双向凝胶电泳进行蛋白质点的分离,获得了重复性较好的凝胶图谱,采用PDQUEST 2-DE软件分别对差异蛋白质进行比较分析,经质谱鉴定了50个蛋白质(卵黄蛋白除外),其中16个蛋白质只在注射了ATG-M0的实验组中有表达,18个蛋白质在实验组中表达上调,7个蛋白质只在对照组中有表达,9个蛋白质在对照组中表达上调。通过对这些鉴定的差异蛋白质点的功能分析,发现了一些与细胞分化、神经发育、眼睛发育、信号转导、发育调控相关的差异蛋白质。这些蛋白质都可能直接或间接地受到 Vsx珀勺调控。如Prohibitin-2(PHB2)、Nme2 protein等只在实验组中表达或表达上调,与文献报道的gsxl是一个转录抑制子相符,表明gsxl下游确实存在着多种转录因子,gsxl有可能是通过这些转录因子来间接调控各功能基因的表达的。