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目的:
观察加味四逆散含药血清对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖、凋亡的影响,探讨加味四逆散抗肝纤维化的作用及其机制。
方法:
以不同浓度的加味四逆散含药血清[加味四逆散低浓度组(含生药量0.78g/ml)、加味四逆散中浓度组(含生药量1.56g/ml)、加味四逆散高浓度组(含生药量3.12g/ml)]作用于体外培养的HSC-T6细胞,作用时间分别为12、24、48h后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组HSC-T6。采用流式细胞仪和TUNEL法检测对HSC-T6凋亡的影响。
结果:
(1)加味四逆散含药血清作用于体外培养大鼠HSC-T6后,细胞增殖受到明显抑制,呈时间和浓度依赖性,各浓度组与空白对照组相比较差异有显著性(P<0.01),加味四逆散低、中、高浓度组与鳖甲软肝片组相比较,除高浓度组作用12h、24h时差异无统计学意义(P>0.05)外,其余差异均有统计学意义(P<0.05);高浓度组与HSC作用48h后,抑制率达47%,高于阳性对照组43%。(2)流式细胞仪分析:加味四逆散高、中、低浓度组、复方鳖甲软肝片组与HSC作用12h、24h、48h后,与空白对照组相比较差异均有显著性(P<0.05);与鳖甲软肝片组比较,除加味四逆散低浓度组作用12h时差异无统计学意(P>0.05),其余差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)加味四逆散高浓度药物血清作用48h后,TUNEL检测表明,光镜下细胞核中有棕黄色颗粒者为凋亡细胞,加昧四逆散高浓度组作用48h后凋亡率(39.30±2.25)%,明显高于鳖甲软肝片(30.0±3.92)%。
结论:
加味四逆散含药血清可明显抑制体外培养HSC-T6的增殖,并能显著促进HSC-T6凋亡,这可能是加味四逆散含药血清抗肝纤维化的作用机制之一。