【摘 要】
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近年的研究表明,海绵微生物是某些海绵天然产物的真正产生者.因此,人们将海绵微生物作为开发海绵天然产物的重要来源之一.采用琼脂块法和液体扩散法,从分离自中国黄渤海大连
【出 处】
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中国科学院研究生院 中国科学院大学
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近年的研究表明,海绵微生物是某些海绵天然产物的真正产生者.因此,人们将海绵微生物作为开发海绵天然产物的重要来源之一.采用琼脂块法和液体扩散法,从分离自中国黄渤海大连海域的海绵优势种--繁茂膜海绵的28株放线菌中筛选到4株具有抗菌活性的放线菌,并对它们进行生物学鉴定.采用经典和现代分类鉴定方法,对4株具有抗菌活性的繁茂膜海绵放线菌的形态特征、培养特征、生理生化特征、细胞壁化学组分和16SrRNA序列进行了研究,得出种水平的鉴定结果:Hmp-S14为西唐氏链霉菌Streptomycessetonii;Hmp-S19为灰色链霉菌Streptomyces griseus;Hmp-S24为桔橙小单孢菌Micromonospora aurantiaca;Hmp-S26为生二素链霉菌Streptomycesambifaciens.在四株具有抗菌活性的繁茂膜海绵放线菌中,菌株Hmp-S19的抗菌活性优于其它三株,并且与已报道的20多种灰色链霉菌菌株有不同的生理生化特性,故进一步优化其发酵条件并初步研究了S19抗菌素的理化性质.通过单因子和均匀设计实验,优化菌株Hmp-S19摇瓶发酵条件.确定最佳发酵培养基:玉米粉0.6％,葡萄糖0.1％,豆饼粉0.5％,NaCl 0.3％,KH2PO40.08％,CaCO30.08％,MgSO40.02％;最佳发酵条件:接种龄30h,接种量5％,初始pH7.0,发酵时间96h,装液量100ml/500ml,培养温度28℃.应用二剂量法测定S19-抗菌素的相对效价,为5154u/ml,较原始发酵培养基和发酵条件(3364u/ml)提高了53％.通过pH纸层析和捷克八溶剂系统纸层析试验,初步判定S19抗菌素为两性、非水溶性Ⅰ型抗菌素.Hmp-S19发酵液经预处理、萃取、硅胶柱层析、制备薄层层析等步骤,对S19抗菌素进行分离纯化,得粗制品,并进行了液相色谱-质谱检测.
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