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蛙病毒(Ranaviruses)和呼肠孤病毒(Reoviruses)是普遍危害水产养殖动物健康和威胁野生水生动物种群数量的两大类重要病毒病原。基于新分离到的中国大鲵蛙病毒(ADRV)和新建的大鲵脾细胞系(GSSC)、对沼泽绿牛蛙病毒(RGV)及几株鱼类呼肠孤病毒(如:牙鲆呼肠孤病毒SMReV,鲈鱼呼肠孤病毒MsReV和草鱼呼肠孤病毒GCRV-109)基因组进行剖析的前期研究基础上，围绕蛙病毒和呼肠孤病毒开展超微病理、功能基因鉴定、单抗制备和免疫测定等相关研究，主要结果有: 1.大鲵蛙病毒(Andrias davidianus ranavirus，ADRV)在鲤鱼上皮细胞(Epithelioma papulosum cyprinid, EPC)和大鲵脾细胞(Chinese giantsalamander spleen cell，GSSC)中扩增，导致宿主细胞超微病理变化。对ADRV感染GSSC和EPC细胞的超薄切片进行电镜观察，可见在这两种细胞内都扩增有大量子代病毒颗粒，有的在细胞核中呈散在或者聚集，有的在空泡周围呈散在或聚集，有的在病毒装配区中或病毒装配区外侧呈晶格状排列。同时，ADRV感染引起宿主细胞的超微病理变化有:细胞核显著变形甚至碎片化，内外核膜分离，部分核中或核膜之间形成空泡，核质严重固缩、边缘化或稀疏化。在宿主细胞质中，有许多大小不一的空泡，边缘清晰或模糊，部分胞质呈网状空泡化，超大的病毒装配区及围绕其周围的线粒体在胞质中形成。可见ADRV对常用鱼类细胞EPC和新建大鲵细胞GSSC的感染实验及超微病理观察，为进一步了解两栖类蛙病毒与宿主相互作用提供了适时和更精准的反馈。 2.鉴定沼泽绿牛蛙蛙病毒(Rana grylio virus，RGV)43R是囊膜蛋白基因。基于RGV43R同源序列在蛙病毒中的氨基酸序列多重比对，设计引物，经PCR扩增、克隆和原核表达，获得43Rd30aa-His融合蛋白;用纯化的融合蛋白制备抗43R抗体，又经对病毒膜蛋白提取分离、Western blot分析结合43R转录和表达时序、亚细胞定位等分析，鉴定了RGV43R是一个能编码167个氨基酸、有典型双跨膜结构域等特征的病毒膜蛋白基因。在RGV感染细胞8h后，可检测到RGV43R转录本;在病毒感染细胞36 h后才检测到RGV43R表达。进一步经间接免疫荧光分析(Immunofluorescence assay，IFA)显示，RGV43R在宿主EPC细胞质中呈点状分布。 3.制备的鱼类呼肠孤病毒杂交瘤单克隆抗体可运用于对不同来源的鱼类呼肠孤病毒免疫测定。以纯化的GCRV为抗原免疫Balb/c小鼠，经细胞融合、阳性杂交瘤细胞筛选及克隆，获得3株分泌抗GCRV单抗的杂交瘤细胞株(4A3、4B6和5C4)。单抗分型显示三株单抗都属于IgG2b;间接ELISA检测单抗4A3、4B6和5C4的腹水效价分别为1∶1000、1∶10和1∶100; Western blot分析表明3株单抗都能特异性地识别GCRV中分子量约为69 kDa的蛋白(推导为VP5)，而单抗4B6还识别一个分子量约为54 kDa的蛋白。间接IFA方法显示三株单抗都可以在感染36h后的细胞质中检测到病原;随后又用Western blot方法检测4株鱼类呼肠孤病毒，即草鱼呼肠孤病毒(GCRV)、大菱鲆呼肠孤病毒(Scophthalmus maximus reovirus，SMReV)、鲈鱼呼肠孤病毒(Microptererussalmonides reovirus，MsReV)和草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus-109，GCReV-109)。结果表明:GCRV均能被三株单抗识别;而SMReV和MsReV也能被单抗4A3识别。另外，针对感染病毒后不同时间的细胞进行光学显微镜观察，同时利用间接IFA方法检测，结果在感染36 h的胞质中开始观察到CPE，而通过间接IFA在感染12h的胞质中就检测到荧光信号。 本研究阐明大鲵蛙病毒(ADRV)可引起包括大鲵脾细胞(GSSC)和鲤鱼上皮细胞(EPC)在内的不同水生物种细胞发生显著超微病理变化;新鉴定蛙病毒RGV43R是一个编码有典型膜蛋白结构的基因;在运用杂交瘤技术筛选到抗GCRV单抗、证实所制备单抗具有识别不同鱼类呼肠孤病毒的基础上，建立能对这类病毒进行灵敏准确定位的间接IFA方法。可见，通过上述系列研究，积累相应的数据资料与实验材料，拓展有关两栖类蛙病毒和鱼类呼肠孤病毒的知识。